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原文传递中药麦冬的指纹图谱检测方法

专利名称：	中药麦冬的指纹图谱检测方法
摘要：	本发明公开了中药麦冬的指纹图谱检测方法，该方法包括供试液的制备、麦冬对照药材溶液的制备、对照品的制备、对照指纹图谱的建立和供试液指纹图谱的测定。本发明根据中药麦冬中所含的活性成分，包括皂苷类、黄酮类和多糖类化合物的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本发明提供的中药麦冬的指纹图谱检测方法可以全面、客观、准确的检测和评价麦冬的质量，为保证临床疗效具有重要意义。
专利类型：	发明专利
申请人：	常熟雷允上制药有限公司
发明人：	秦雨程;阙瑞艳;张礼学
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
申请号：	CN201911389879.2
公开号：	CN111024855A
代理机构：	南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：	程斯佳
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/54;G01N30/86
申请人地址：	215500 江苏省盐城市常熟市深圳路52号
主权项：	1.中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备；（2）麦冬对照药材溶液的制备；对照品的制备；高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱；高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱；（6）对照品溶液的测定；（7）将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 2.根据权利要求1所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备：取批量麦冬，分别加有机溶剂提取，合并滤液，蒸干，残渣加水溶解，通过柱层析去渣后取洗脱液，蒸干，用有机溶剂溶解定容，微孔滤膜滤过，即得；（2）麦冬对照药材溶液的制备；取批量的麦冬对照药材，分别加有机溶剂提取，合并滤液，蒸干，残渣加水溶解，通过柱层析去渣后取洗脱液，蒸干，用有机溶剂溶解定容，微孔滤膜滤过，即得；（3）对照品的制备精密取麦冬皂苷B、麦冬皂苷C和麦冬皂苷D加有机溶剂溶解成混合对照品溶液；（4）高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱：取步骤（2）中的批量麦冬对照药材溶液，注入HPLC进行分析，测得各批次麦冬对照药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤（1）中的批量麦冬供试品溶液按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析，测得供试品溶液的指纹图谱；（6）对照品溶液的测定：取步骤（3）的对照品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析；（7）将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 3.根据权利要求2所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备：取批量麦冬，粉碎，过筛，分别精密取麦冬，加有机溶剂超声处理，滤过，滤渣再加有机溶剂，超声处理，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水微热使溶解，加于C18小柱上，以水洗脱，水液弃去，继用低浓度的有机溶剂洗脱，洗脱液弃去，最后用高浓度的有机溶剂洗脱，收集洗脱液，蒸干，用有机溶剂溶解定容，微孔滤膜滤过，即得；（2）麦冬对照药材溶液的制备；取批量的麦冬对照药材，粉碎，过筛，分别精密取麦冬，加有机溶剂，浸渍，超声处理，滤过，滤渣再加有机溶剂，超声处理，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水微热使溶解，加于C18小柱上，以水洗脱，水液弃去，继用低浓度的有机溶剂洗脱，洗脱液弃去，最后用高浓度的有机溶剂洗脱，收集洗脱液，蒸干，用有机溶剂溶解定容，微孔滤膜滤过，即得；（3）对照品的制备精密取麦冬皂苷B、麦冬皂苷C和麦冬皂苷D加有机溶剂溶解成混合对照品溶液；（4）高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱：取步骤（2）中的批量麦冬对照药材溶液，注入HPLC进行分析，测得各批次麦冬对照药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤（1）中的批量麦冬供试品溶液按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析，测得供试品溶液的指纹图谱；（6）对照品溶液的测定：取步骤（3）的对照品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析；（7）将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 4.根据权利要求3所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备：取批量麦冬，分别粉碎，过筛，分别精密取麦冬，加甲醇，浸渍过夜，超声处理，滤过，滤渣再加甲醇，超声处理，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水微热使溶解，加于安捷伦C18小柱上，以水洗脱，水液弃去，继用甲醇洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（2）麦冬对照药材溶液的制备；取批量的麦冬对照药材，分别粉碎，过筛，分别精密取麦冬，加甲醇，浸渍过夜，超声处理，滤过，滤渣再加甲醇，超声处理，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加水微热使溶解，加于已活化好的安捷伦C18小柱上，以水洗脱，水液弃去，继用甲醇洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（3）对照品的制备精密取麦冬皂苷B、麦冬皂苷C和麦冬皂苷D加甲醇溶解成混合对照品溶液；（4）高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱：取步骤（2）中的批量麦冬对照药材溶液，注入HPLC进行分析，测得各批次麦冬对照药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤（1）中的批量麦冬供试品溶液按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析，测得供试品溶液的指纹图谱；（6）对照品溶液的测定：取步骤（3）的对照品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析；（7）将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 5.根据权利要求4所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备：取批量麦冬，分别粉碎，依次过3号筛，分别精密取1~5g，加甲醇20~100ml，浸渍过夜，超声处理20~30min，滤过，滤渣再加甲醇20~100ml，超声处理20~30min，滤过，合并2次滤液，蒸干，残渣加水2~10ml微热使溶解，加于已活化好的安捷伦C18小柱上，以水8ml洗脱，水液弃去，继用20%甲醇8ml~40mL洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇3~15ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容至1~5ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（2）麦冬对照药材溶液的制备；取批量的麦冬对照药材，分别粉碎，依次过3号筛，分别精密取1~5g，加甲醇20~100ml，浸渍过夜，超声处理20~30min，滤过，滤渣再加甲醇20~100ml，超声处理20~30min，滤过，合并2次滤液，蒸干，残渣加水2~10ml微热使溶解，加于已活化好的安捷伦C18小柱上，以水8ml洗脱，水液弃去，继用20%甲醇8ml~40mL洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇3~15ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容至1~5ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（3）对照品的制备精密取麦冬皂苷B、麦冬皂苷C和麦冬皂苷D加甲醇溶解成浓度分别为1.5~4.5mg/mL、1.25~2.5mg/mL和2~4mg/mL的混合对照品溶液；（4）高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱：取步骤（2）中的批量麦冬对照药材溶液，注入HPLC进行分析，测得各批次麦冬对照药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤（1）中的批量麦冬供试品溶液按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析，测得供试品溶液的指纹图谱；（6）对照品溶液的测定：取步骤（3）的对照品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析；将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 6.根据权利要求5所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）麦冬供试品溶液制备：取批量麦冬，分别粉碎，依次过3号筛，分别精密取1g，加甲醇20ml，浸渍过夜，超声处理20min，滤过，滤渣再加甲醇20ml，超声处理20min，滤过，合并2次滤液，蒸干，残渣加水2ml微热使溶解，加于已活化好的安捷伦C18小柱上，以水8ml洗脱，水液弃去，继用20%甲醇8ml洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇3ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（2）麦冬对照药材溶液的制备；取批量的麦冬对照药材，分别粉碎，依次过3号筛，分别精密取1g，加甲醇20ml，浸渍过夜，超声处理20min，滤过，滤渣再加甲醇20ml，超声处理20min，滤过，合并2次滤液，蒸干，残渣加水2ml微热使溶解，加于已活化好的安捷伦C18小柱上，以水8ml洗脱，水液弃去，继用20%甲醇8ml洗脱，洗脱液弃去，最后用甲醇3ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解定容至1ml，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得；（3）对照品的制备精密取麦冬皂苷B、麦冬皂苷C和麦冬皂苷D加甲醇溶解成浓度分别为1.5mg/mL、1.25mg/mL和2mg/mL的混合对照品溶液；（4）高效液相色谱法测定麦冬的对照药材的指纹图谱：取步骤（2）中的批量的麦冬对照药材溶液，注入HPLC进行分析，测得各批次麦冬对照药材的指纹图谱，以这些指纹图谱为基础，用相似度软件计算获得共有模式作为对照指纹图谱；（5）高效液相色谱法测定供试品溶液指纹图谱：取步骤（1）中的批量的麦冬供试品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析，测得供试品溶液的指纹图谱；（6）对照品溶液的测定：取步骤（3）的对照品溶液，按步骤（4）相同的色谱条件注入HPLC进行分析；（7）将步骤（5）得到的供试品溶液指纹图谱和步骤（4）得到的对照指纹图谱用相似度软件评价，并用步骤（6）的对照品溶液标定特征峰。 7.根据权利要求1至6任一项所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤（4）中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：乙腈为A相，冰醋酸水为B相，梯度洗脱，检测波长：205~220nm；柱温：25~35 ℃；流速：0.5~1.5 ml/min；进样量：5~10 μl。 8.根据权利要求7所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤（4）中色谱条件为：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈为A相，含有体积浓度的0.01~0.05%的冰醋酸水为B相，梯度洗脱，检测波长：205~210nm；柱温：30 ~35 ℃；流速：0.8~1.0 ml/min；进样量：10 μl。 9.根据权利要求8所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，色谱柱为安捷伦SB C18，型号为：250 mm ×4. 6 mm，5μm；流动相：乙腈为A相，含有体积浓度的0.01%的冰醋酸水为B相，梯度洗脱，检测波长：205nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。 10.根据权利要求7~9任一项所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，梯度洗脱条件为： 0~59min，A相35%~62%；59~60min，A相62%；60~61min，A相62~35%；61~70min，A相35%。 11.根据权利要求6所述的中药麦冬的指纹图谱检测方法，其特征在于，一共测定得到15个特征峰，其中9号峰为麦冬皂苷C，10号峰为麦冬皂苷D，11号峰为麦冬皂苷B。
所属类别：	发明专利