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原文传递基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒及其制备使用方法

专利名称：	基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒及其制备使用方法
摘要：	本发明提供了一种基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2；反应缓冲液R1包括缓冲液、无机盐、增浊剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂；胶乳试剂R2包括至少两种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种组成液分别包括胶乳保存液以及保存在胶乳保存液中的相应LN单抗标记的胶乳微球；其中，每种组成液之间的混合比例为1:1。本发明还提供了一种上述试剂盒的制备使用方法。本发明可在全自动生化分析仪上使用，相比其他方法，不仅操作简单、检测速度快，而且选择性好、特异性佳、精密度高、重复性与一致性好。
专利类型：	发明专利
申请人：	安徽大千生物工程有限公司
发明人：	芮双印;任传伍
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T08:00:00+0805
申请号：	CN201911407981.0
公开号：	CN111122874A
代理机构：	合肥兴东知识产权代理有限公司
代理人：	李静
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543
申请人地址：	231200 安徽省合肥市经开区桃花工业园繁华大道工投·立恒工业广场B12C
主权项：	1.一种基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，包括包括反应缓冲液R1和胶乳试剂R2；所述反应缓冲液R1包括的成分及相应含量为：缓冲液3-10g/L，无机盐5-15g/L，增浊剂10-30g/L，防腐剂1-3mL/L，稳定剂3-14g/L，表面活性剂0.5-2.5mL/L，溶剂为纯化水；所述胶乳试剂R2包括至少两种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液，每种胶乳试剂组成液分别包括胶乳保存液以及保存在所述胶乳保存液中、且终浓度为0.5-1.0mg/mL的相应LN单抗标记的胶乳微球；所述胶乳保存液包括的成分及相应含量为：缓冲液2-10g/L，无机盐5-15g/L，稳定剂20-46g/L，防腐剂0.2-0.8mL/L，表面活性剂1-7mL/L，溶剂为纯化水；其中，在所述胶乳试剂R2中，每种通过LN单抗与胶乳微球偶联而成的胶乳试剂组成液之间的混合比例为1:1。 2.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，在所述反应缓冲液R1中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；所述增浊剂为聚乙二醇1000、聚乙二醇2000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一种或多种；所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中的一种；所述稳定剂为BSA和蔗糖中的一种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。 3.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，所述反应缓冲液R1的pH为6.1-6.6。 4.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，在所述胶乳保存液中：所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液、甘氨酸缓冲液、2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸缓冲液中的一种；所述无机盐为氯化钠、氯化镁、氯化钾、氯化锌、氯化钙中的一种或多种；所述稳定剂为BSA、蔗糖、甘露醇中一种或多种；所述防腐剂为Proclin300和硫柳汞中一种或多种；所述表面活性剂为吐温-20、吐温-80、曲拉通X-100中的一种或多种。 5.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，所述胶乳保存液的pH为6.5-7.7。 6.根据权利要求1所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，所述LN单抗标记的胶乳微球中使用的胶乳微球直径为100-300nm。 7.根据权利要求1-6任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒，其特征在于，所述胶乳试剂R2的制备方法为： ①取固含量为10％的胶乳微球，并加至清洗缓冲液中；离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，并加入活化剂活化；再次离心，用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，制得活化胶乳微球； ②取至少两种LN单抗，各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀，并进行一定时间的偶联，制取偶联后的胶乳微球；其中，所述活化胶乳微球与各LN单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6)，偶联时间为2h； ③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭；封闭结束后，再次离心、去上清，并加入胶乳保存液重悬超声，制取各自的胶乳试剂组成液；然后，将制取的各胶乳试剂组成液混合，即得所需的胶乳试剂R2。 8.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)配制反应缓冲液R1：按照反应缓冲液R1的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得反应缓冲液R1； (2)配制胶乳试剂R2： ①取固含量为10％的胶乳微球，并加至清洗缓冲液中；离心、去上清后用活化缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，并加入活化剂活化；再次离心，用偶联缓冲液对胶乳微球沉淀物重悬超声，制得活化胶乳微球； ②取至少两种LN单抗，各自与制得的活化胶乳微球按照特定比例混匀，并进行一定时间的偶联，制取偶联后的胶乳微球；其中，所述活化胶乳微球与各LN单抗抗体的v/w比均分别为1:(5-6)，偶联时间为2h； ③向上述偶联后的胶乳微球中加入封闭缓冲液进行封闭；封闭结束后，再次离心、去上清，并加入胶乳保存液重悬超声，制取各自的胶乳试剂组成液；然后，将制取的各胶乳试剂组成液混合，即得所需的胶乳试剂R2。 9.根据权利要求8所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒的制备方法，其特征在于，在所述步骤①中，所述清洗缓冲液与活化缓冲液采用MES缓冲液；所述偶联缓冲液采用磷酸盐缓冲液；所述活化剂采用EDAC/NHS；在所述步骤③中，所述封闭缓冲液采用BSA、甘氨酸中的一种或多种，封闭时间1h。 10.一种如权利要求1-7任一所述的基于胶乳增强免疫比浊法测定LN的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括如下具体步骤： (1)吸取5μL样本，加入200μL试剂R1，37℃孵育3-5min； (2)加入50μL试剂R2，置37℃孵育； (3)孵育60s后读取吸光值A1；再孵育5min，读取吸光值A2；最后，计算ΔA，△A＝A2-A1，根据ΔA测算样本中LN含量。
所属类别：	发明专利