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原文传递一种酶标抗溶菌酶金抗体、检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用

专利名称：	一种酶标抗溶菌酶金抗体、检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用
摘要：	本发明公开了一种酶标抗溶菌酶金抗体及检测溶菌酶酶联免疫试剂盒及其应用。该酶标抗溶菌酶金抗体同时具有结合溶菌酶能力及辣根过氧化物酶的特性，并将其应用于酶联免疫中检测鸡蛋清溶菌酶。该酶联免疫试剂盒包括：酶标抗溶菌酶金抗体、酶标板、溶菌酶标准品、标准品稀释液、包被有溶菌酶特异性抗体的酶标板、显色液、样品稀释液、洗涤液和终止液。本发明还公开了利用该试剂盒进行样品检测的方法。本试剂盒采用酶链免疫分析法中的直接法原理，可以对鸡蛋清中的溶菌酶进行定量检测。本试剂盒使用金抗体代替天然抗体进行检测，既降低了生产成本，也避免了交叉反应，且兼具酶联免疫试剂盒的其他优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海大学
发明人：	曹傲能;许艳娇;李文浩;王海芳
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-29T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-18T00:00:00+0800
申请号：	CN202111430993.2
公开号：	CN114200124A
代理机构：	上海上大专利事务所(普通合伙)
代理人：	顾勇华
分类号：	G01N33/535;G01N33/543;G01N33/553;G01N33/573;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/553;G01N33/573
申请人地址：	200444 上海市宝山区上大路99号
主权项：	1.一种酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：利用金纳米粒子结合多肽，形成抗溶菌酶金抗体，同时投加标记了巯基聚乙二醇(HS-PEG)的辣根过氧化物酶(HRP)，通过一步法合成酶标抗溶菌酶金抗体。 2.根据权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：将标记了巯基聚乙二醇(HS-PEG)的辣根过氧化物酶(HRP)与多肽同时投加，使HRP-PEG上的-SH基与金纳米粒子形成Au-S键，在形成金抗体的同时，将金抗体结合HRP，形成酶标抗溶菌酶金抗体，HRP接在单个金纳米粒子上的数量为1-20个。 3.根据权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体，其特征在于：将HS-PEG-COOH与辣根过氧化物酶(HRP)通过EDC-NHS反应，使PEG上的羧基与HRP的氨基反应，形成HS-PEG-HRP。 4.一种检测溶菌酶酶联免疫试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述酶标抗溶菌酶金抗体、空白酶标板、溶菌酶标准品、稀释液、显色液、洗涤液和终止液。 5.根据权利要求1所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒，其特征在于：使用酶标抗溶菌酶金抗体，以酶联免疫直接法对溶菌酶进行检测，具体方法步骤为：将溶菌酶预先包被在空白酶标板上，加入酶标抗溶菌酶金抗体，孵育设定时间后将溶菌酶和酶标抗溶菌酶金抗体两者结合后，通过加入辣根过氧化物酶的底物产生显色反应，反应设定时间后，加入终止液终止反应，并将酶标板放入多功能酶标仪进行检测，得到不同溶菌酶浓度对应的OD450nm值，并做出标准曲线，确定待测溶菌酶样品浓度。 6.一种权利要求4所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒的应用，用于实施检测溶菌酶的方法，其特征在于：包括如下步骤： (1)包被：在酶标板上每孔加入20-200μL不同浓度溶菌酶，采用碳酸盐缓冲溶液作为稀释液，并在4℃下静置过夜，洗板并拍干； (2)封闭：每孔20-200μL的BSA，采用碳酸盐缓冲溶液或磷酸盐缓冲液作为稀释液，室温振荡0.5-2h，洗板并拍干； (3)结合酶标金抗体:加入每孔20-200μL酶标抗溶菌酶金抗体，在室温振荡0.5-3h，洗板并拍干； (4)显色反应:加入每孔20-200μL底物显色液，在避光静置反应5-20min后，加入终止液终止反应； (5)检测分析:使用多功能酶标仪，测定每孔的信号值OD495nm，分析检测结果，以x轴为溶菌酶浓度，y轴为495nm处的OD值，绘制检测溶菌酶的标准曲线。 7.根据权利要求6所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒的应用，其特征在于：稀释液为pH为9-11的缓冲溶液。 8.根据权利要求6所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒的应用，其特征在于：底物显色液为四甲基联苯胺(TMB)或邻苯二胺(OPD)。 9.根据权利要求6所述检测溶菌酶酶联免疫试剂盒的应用，其特征在于：终止液采用硫酸或盐酸，终止液的酸浓度不大于2M。
所属类别：	发明专利