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原文传递一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法

专利名称：	一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法
摘要：	本发明公开了一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，获取包括乳清酸的代谢物作为样品，包括如下步骤：S1、使用提取液从样品中提取代谢物；S2、提供包含稳定同位素标记的内标溶液，所述内标溶液对应于样品中待检测的代谢物；S3、使代谢物和内标溶液离子化以产生离子；S4、多反应监测模式下在质谱图中获得一种或多种离子的质荷比；S5、在多反应监测模式下确定乳清酸的信号强度；S6、使用对应于以上代谢物的稳定同位素标记的内标溶液，检测和定量乳清酸的量。本发明操作简单，使用相同的前处理条件和仪器条件就能实现氨基酸、肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱类、酮类、乳清酸的同时检测，缩减了检测工作步骤和时间，提高了检测效率。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海义准生物有限公司
发明人：	樊静静;陈武炼;强维;王培娟
专利状态：	有效
申请日期：	2021-04-14T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-08T00:00:00+0800
申请号：	CN202110403207.3
公开号：	CN114152706A
代理机构：	上海科律专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	金碎平
分类号：	G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/88
申请人地址：	201609 上海市松江区叶榭镇叶合路59弄1号二层
主权项：	1.一种同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，获取包括乳清酸的代谢物作为样品，其特征在于，包括如下步骤： S1、使用提取液从所述样品中提取所述代谢物； S2、提供包含已知量的一种或多种稳定同位素标记的内标溶液，所述内标溶液对应于样品中待检测的代谢物； S3、使所述代谢物和所述内标溶液离子化以产生离子； S4、多反应监测模式下在质谱图中获得一种或多种离子的质荷比；以及 S5、在多反应监测模式下确定乳清酸的信号强度； S6、使用对应于以上代谢物的稳定同位素标记的内标溶液，检测和定量乳清酸的量。 2.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述代谢物包含氨基酸、游离和酰基肉碱、溶血卵磷脂酰胆碱、琥珀酰丙酮和极长碳链的酰基肉碱中的一种或多种。 3.如权利要求2所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸/异亮氨酸/羟基脯氨酸、蛋氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸和/或缬氨酸；所述游离和酰基肉碱包括游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丙二酰肉碱/3-羟基-异戊酰肉碱、异戊酰肉碱、异戊烯酰肉碱、戊二酰肉碱/3-羟基-己酰肉碱、己酰肉碱、己二酰肉碱、辛酰肉碱、辛烯酰肉碱、癸酰肉碱、癸烯酰肉碱、癸二烯酰肉碱、十二碳酰肉碱、十二碳烯酰肉碱、十四碳酰肉碱、十四碳烯酰肉碱、十四碳二烯酰肉碱、3-羟基-十四碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十六碳烯酰肉碱、3-羟基-十六碳酰肉碱、3-羟基-十六碳烯酰肉碱、十八碳酰肉碱、十八碳烯酰肉碱、十八碳二烯酰肉碱、3-羟基-十八碳酰肉碱和/或3-羟基-十八碳烯酰肉碱；所述极长碳链的酰基肉碱包括C20-脂酰肉碱、C22-脂酰肉碱、C24-脂酰肉碱和/或C26-脂酰肉碱；所述溶血卵磷脂酰胆碱包括C20-LPC、C22-LPC、C24-LPC和/或C26-LPC。 4.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述提取液由甲醇、水和羧酸组成，所述甲醇的体积含量为50％-100％，羧酸浓度为0.05-1mol/L，溶剂为水，所述羧酸选自甲酸、乙酸和草酸中的一种或其组合。 5.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述样品为体液样品或血液样品。 6.如权利要求5所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述样品为干燥的血液样品。 7.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述步骤S3通过将提取的代谢物和内标溶液制成的标准品通过液相系统输送至质谱仪的离子源进行离子化，所述步骤S4使用三重四极杆质谱仪或高分辨率质谱仪获取一种或多种离子的质荷比，所述步骤S5通过选择至少一种精确的质荷比离子确定乳清酸的信号强度。 8.如权利要求7所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述液相系统所用的流动相溶液由乙腈、水和饱和一元羧酸组成，所述乙腈的体积含量为50％-100％，所述饱和一元羧酸浓度为0.05-1mol/L，溶剂为水，所述饱和一元羧酸为甲酸、乙酸、丙酸或丁酸。 9.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述内标溶液为对应于以下一种或多种稳定同位素标记的内标准品：丙氨酸、精氨酸、瓜氨酸、甘氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、游离肉碱、乙酰肉碱、丙酰肉碱、丙二酰肉碱、异戊酰肉碱、戊二酰肉碱、己酰肉碱、辛酰肉碱、癸酰肉碱、癸烯酰肉碱、十二碳酰肉碱、十四碳酰肉碱、十六碳酰肉碱、十八碳酰肉碱、C26-脂酰肉碱、C26-LPC、乳清酸和琥珀酰丙酮衍生物3-(5甲基-1H-吡唑-3yl)丙酸。 10.如权利要求1所述的同时检测干血片中多种新生儿筛查代谢物的方法，其特征在于，所述内标溶液为对应于以下一种或多种稳定同位素标记的内标准品：2H4-丙氨酸，2H4,13C-精氨酸、2H2-瓜氨酸、14N,2-13C-甘氨酸、2H3-亮氨酸、2H3-蛋氨酸、2H6-鸟氨酸、13C6-苯丙氨酸、13C5-脯氨酸、13C6-酪氨酸、2H4-缬氨酸、2H9-游离肉碱、2H3-乙酰肉碱、2H3-丙酰肉碱、2H6-戊二酰肉碱、2H3-丁酰肉碱、2H9-异戊酰肉碱、2H3-己酰肉碱、2H3-辛酰肉碱、2H3-癸酰肉碱、2H3-十二碳酰肉碱、2H3-十四碳酰肉碱、2H3-十六碳酰肉碱、2H3-十八碳酰肉碱、2H3-二十六碳酰肉碱、2H4-C26:0-LPC、15N2-乳清酸和13C5-MPP3。
所属类别：	发明专利