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原文传递一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法

专利名称：	一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法
摘要：	本发明公开了一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，打1～3个血斑样本，置于离心管，加入第一萃取液，涡旋25～35min；加入内标溶液和第二萃取液，涡旋2～4min；离心后取上清液转移至另一离心管，氮气吹干，加入复溶液，涡旋2～3min，取复溶液进样分析；将步骤(1)制备好的干血片样品溶液注入LC‑MS/MS中，记录色谱图；获得多种脂溶性维生素的保留时间及质谱数据。本发明的检测方法简单灵敏、快速准确、专属性强、重复性好，可用于干血片中多种脂溶性维生素的检测。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	安徽;34
申请人：	合肥谱佳医学检验实验室有限公司
发明人：	江振作;王旭;徐元宏;王兰芳;朱俊;王超;华振祥
专利状态：	有效
申请日期：	2019-06-10T00:00:00+0800
发布日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
申请号：	CN201910496859.9
公开号：	CN110174476A
代理机构：	合肥昊晟德专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	王林
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	230088 安徽省合肥市高新区创新大道2800号创新产业园E3栋12楼
主权项：	1.一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)测试样本的制备打1～3个血斑样本，置于离心管，加入第一萃取液，涡旋25～35min；然后加入内标溶液和第二萃取液，涡旋2～4min；离心后取上清液转移至另一离心管，氮气吹干，加入复溶液，涡旋2～3min，取复溶液进样分析； (2)检测条件色谱条件色谱柱：反相色谱柱；柱温：30～60℃；流速：0.3～0.6mL/min；流动相体系：水-甲醇体系，采用梯度洗脱；质谱条件离子源：电喷雾离子源，正离子模式；扫描模式：多反应监测MRM模式； (3)记录结果将步骤(1)制备好的干血片样品溶液注入LC-MS/MS中，记录色谱图；获得多种脂溶性维生素的保留时间及质谱数据。 2.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述第一萃取液选自水、甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述内标溶液为维生素A、25-羟基维生素D、维生素E的混合同位素甲醇溶液。 4.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述第二萃取液为乙酸乙酯、叔丁基甲醚、二氯甲烷、正己烷、环己烷中的至少一种。 5.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述离心条件为：2～8℃，10000～14000rpm，离心4～6min。 6.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述复溶液为水、甲酸、甲醇、乙腈、异丙醇中的至少一种。 7.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述反相色谱柱为十八烷基硅烷键合的C18的色谱柱，填料粒径为1.7～5.0μm，内径为2.1～4.6mm，柱长为25～150mm。 8.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述流动相体系为A相0.1％甲酸水溶液～B相0.1％甲酸甲醇溶液。 9.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述梯度洗脱条件为：0～2min：70～90％B，2～2.5min：90～100％，2.5～3.5min：100％B，3.5～3.7min：100～70％B，3.7～5.0min：70％B。 10.根据权利要求1所述的一种干血片中多种脂溶性维生素的液相色谱串联质谱的检测方法，其特征在于，所述多级反应监测MRM模式的条件为：维生素A，m/z 269.2>93.0；维生素A-d4，m/z 273.2>94.2； 25-羟基维生素D2，m/z 413.2>395.4；25-羟基维生素D2-d3，m/z 416.4>398.2；25-羟基维生素D3，m/z 401.4>383.4；25-羟基维生素D3-13C5，m/z 406.3>388.4；维生素E，m/z 431.4>165.1；维生素E-d6，m/z 437.2>171.2。
所属类别：	发明专利