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干血片中25-羟基维生素D的高效液相色谱串联质谱检测方法
| 专利名称： | 干血片中25-羟基维生素D的高效液相色谱串联质谱检测方法 |
| 摘要： | 本发明公开了一种干血片中25‑羟基维生素D的高效液相色谱串联质谱检测方法，包括如下步骤：(1)超声萃取，取干血片样品，加入萃取溶剂，超声萃取，随后加入内标工作溶液，涡旋混合，离心，取上层萃取液，氮气吹干；(2)衍生化反应，步骤(1)处理后样品，加入PTAD衍生化工作溶液复溶，恒温反应，然后加入乙醇终止反应，氮气吹干；(3)复溶，采用高效液相色谱串联质谱法进行分析检测。本发明方法效率高，通量高，成本低，操作简便、准确度高、灵敏度高，与其他检测项目无冲突限制，适用于大批量临床样本的快速检测；同时干血片法对受试者的创伤相对较小,取血量少,样品采集运输方便，容易保存,稳定性好,特别适用于静脉采血困难人群(如婴幼儿)的检测。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 杭州凯莱谱精准医疗检测技术有限公司 |
| 发明人： | 马金飞;冯加翼;康洲阳;刘华芬 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810951503.5 |
| 公开号： | CN109001329A |
| 代理机构： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 |
| 代理人： | 陈娟 |
| 分类号： | G01N30/02(2006.01)I;G01N30/06(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06 |
| 申请人地址： | 310013 浙江省杭州市余杭区仓前街道海创科技中心3幢1603-2室 |
| 主权项： | 1.干血片中25‑羟基维生素D的高效液相色谱串联质谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)超声萃取：用打孔器取2个血斑样本，加入96孔板A中，加入700μL萃取溶剂，超声萃取，加入10μL内标工作溶液，涡旋混匀，离心，取600μL萃取液转移至96孔板B中，氮气吹干；(2)衍生化反应：将40～100μL PTAD衍生化工作溶液加入到步骤(1)的残渣中，涡旋10s，随后置于40～65℃烘箱恒温反应10～30min，冷却2min，加入20～50μL乙醇终止反应，涡旋10s，氮气吹干；(3)将步骤(2)得到的残渣，进一步用60～100μL复溶液复溶，涡旋使充分溶解，离心5min，上清液转移至96孔板C中，上高效液相色谱串联质谱系统进样20～40μL分析检测；其中高效液相色谱串联质谱为三重四级杆质谱仪，通过高效液相色谱串联质谱法测定经预处理后的样品溶液，采用梯度洗脱反相色谱法建立待测物的分离条件如下：以水‑甲醇‑甲酸为流动相体系，色谱柱为C18柱，流动相的流速为0.4～1.0mL/min，柱温为30～45℃，采用多反应监测扫描模式(MRM)。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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