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原文传递检测鱼肉新鲜度的胶体金免疫层析试纸条及其制备和应用

专利名称：	检测鱼肉新鲜度的胶体金免疫层析试纸条及其制备和应用
摘要：	本发明属于食品技术领域，具体涉及一种检测鱼肉新鲜度的胶体金免疫层析试纸条及其制备方法和应用。该胶体金免疫层析试纸条，包括底板、检测垫、金标垫、样品垫和吸水垫；所述检测垫上设有T线和C线，所述T线喷涂小清蛋白，所述C线喷涂羊抗鼠多克隆抗体；所述金标垫上喷涂有胶体金标记的小清蛋白单克隆抗体。本发明使用小清蛋白反映鱼肉新鲜度客观、准确；胶体金免疫层析试纸检测取样量少，对检测样品破坏小；灵敏度高，操作简便；检测时间短、检测结果直观；目标分析物明确，蛋白可与抗体特异性结合，可实现特异性检测；试纸条稳定性好，实验结果可长期保存；检测过程无有害物质参与，是一种绿色环保的检测手段。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江南大学
发明人：	杨方;陈红;吴仪;王淑芬;姜启兴;许艳顺;于沛沛;夏文水;余达威;高沛
专利状态：	有效
申请日期：	2021-12-07T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-22T00:00:00+0800
申请号：	CN202111488784.3
公开号：	CN114217072A
代理机构：	苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	夏苏娟
分类号：	G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/52;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/52
申请人地址：	214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号
主权项：	1.一种检测鱼肉新鲜度的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，包括底板、检测垫、金标垫、样品垫和吸水垫；所述检测垫设置于所述底板的中部，检测垫上设有T线和C线，所述T线喷涂小清蛋白，所述C线喷涂羊抗鼠多克隆抗体；所述样品垫设置于底板上靠近所述检测垫T线的一侧，所述金标垫交叠设置于样品垫与检测垫之间，金标垫上喷涂有胶体金标记的小清蛋白单克隆抗体；所述吸水垫设置于底板上靠近所述检测垫C线的一侧并部分交叠于检测垫上。 2.一种检测鱼肉新鲜度的胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤， S1：提取纯化鱼肉小清蛋白； S2：将所述小清蛋白和羊抗鼠多克隆抗体喷涂在检测垫基材上分别形成T线和C线，烘干得到检测垫； S3：将样品垫、吸水垫和所述检测垫组装到底板上，切割，得到宽度为3-4mm的试纸条； S4：采用胶体金标记小清蛋白单克隆抗体，得到金标抗体，将所述金标抗体喷涂在活化金标垫上，得到金标垫；将所述金标垫组装到所述试纸条中，得到所述胶体金免疫层析试纸条。 3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1的具体步骤如下， S1.1：将鱼肉充分搅碎后加入缓冲液I，均质后离心，得到上清液A； S1.2：对所述上清液A进行加热处理后离心，得到上清液B； S1.3：将所述上清液B经盐析后分离，得到沉淀物； S1.4：取所述沉淀物溶于缓冲液II中，4℃透析过夜； S1.5：将透析好的液体经微孔滤膜过滤，上样于离子交换柱，用洗脱液进行梯度洗脱，流速为1mL/min，收集各组分并测定其在220nm、280nm出的紫外吸收值并进行SDS-PAGE检测，确定鱼肉小清蛋白所在组分，完成鱼肉小清蛋白的提取纯化。 4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，将所述小清蛋白经PB溶解至浓度为0.5-1.5mg/mL喷涂T线，喷涂量为1μL/cm；将羊抗鼠多克隆抗体经PB稀释至浓度为1.0-2.0mg/mL喷涂C线，喷涂量为1μL/cm。 5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，样品垫由未活化的样品垫在样品处理液中浸泡后烘干得到；所述样品处理液为含有表面活性物质、糖类和大分子的缓冲溶液。 6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，活化金标垫由未活化金标垫在金标垫处理液中浸泡并烘干；所述金标垫处理液为含有表面活性物质、糖类和大分子的缓冲溶液。 7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，金标抗体的制备方法如下： SS1：向氯金酸溶液中加入还原剂，加热反应，调节pH至5.0-9.0，得到胶体金溶液； SS2：向所述胶体金溶液中加入小清蛋白单克隆抗体，混匀后静置；加入BSA溶液，混匀后静置；加入PEG20000溶液，混匀后静置；得到混合液； SS3：分离所述混合液，得到沉淀，重悬，得到所述金标抗体。 8.如权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中，胶体金标记小清蛋白单克隆抗体的标记量为18-30μg/mL，金标抗体的的喷涂量为6-8μL。 9.如权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条用于检测鱼肉新鲜度的应用，其特征在于，包括以下步骤，将鱼肉渗出汁液或提取的肌浆蛋白稀释后，滴于样品垫上，室温条件下侧向层析10-15min，待显色稳定后测定T/C值，根据T/C值判断鱼肉新鲜度。 10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述肌浆蛋白的提取方法为，鱼肉充分搅碎后加入缓冲液III，均质1-2min，4℃静置，冷冻离心取上清。
所属类别：	发明专利