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原文传递一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法

专利名称：	一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法
摘要：	本发明公开了一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法，包括以下步骤：(1)MSX衍生：采用AQC衍生试剂，利用AccQ Tag方法分别对MSX标准溶液和待测样品溶液进行衍生化处理得到衍生化标准品和衍生化待测样品；(2)液相色谱检测：分别将衍生化标准品和衍生化待测样品进行液相色谱检测，对检测结果进行分析，绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样品溶液中MSX的浓度。本发明方法衍生简单，无需复杂衍生试剂的配制或萃取，检测快速，反应时间短，衍生约需要10min即可。无需特殊仪器设备，且流动相配制简单，单个流动相配制时无需与有机溶剂混合。进样体积约5μL，便于微量样品的检测。本方法的检测下限为25pmol，比目前专利方法低80％，显著低于目前专利报道的检测下限。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海臻格生物技术有限公司
发明人：	张存超;宋昱瑛;沈春雷;伍维;左帅;陈经公;那可;陈建新
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-23T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-11T00:00:00+0800
申请号：	CN202111403679.5
公开号：	CN114166964A
代理机构：	苏州满天星知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	赵静
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
申请人地址：	201419 上海市浦东新区中国(上海)自由贸易试验区临港新片区新杨公路860号6幢一层、一层夹层及二层
主权项：	1.一种蛋氨酸亚砜酰亚胺快速检测方法，其特征在于：该方法包括以下步骤： (1)MSX衍生：采用AQC衍生试剂6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯利用AccQ Tag方法分别对MSX标准溶液和待测样品溶液进行衍生化处理得到衍生化标准品和衍生化待测样品； (2)液相色谱检测：分别将衍生化标准品和衍生化待测样品进行液相色谱检测，对检测结果进行分析，绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样品溶液中MSX的浓度；所述液相色谱检测的色谱条件为：Aglient Pursuit XRs 5C18色谱柱，流动相A相为0.05～0.15mol/L乙酸钠水溶液，pH 6.0～7.0；流动相B相为100％乙腈；色谱柱温度为30～40℃，采用流动相进行梯度洗脱。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述流动相的洗脱梯度为：按体积百分含量计，洗脱开始采用93％流动相A，7％流动相B；15min开始为82％流动相A，18％流动相B；18min开始为50％流动相A，50％流动相B；23～33min为20％流动相A，80％流动相B；33.01～40min为93％流动相A，7％流动相B。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述液相色谱检测的色谱条件为：Aglient Pursuit XRs 5C18 250×4.6mm色谱柱，流动相A相为0.1mol/L乙酸钠水溶液，pH6.5；流动相B相为100％乙腈；色谱柱温度为35℃。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述检测的波长254nm；进样量5μL；流动相流速为1.0ml/min。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述的液相色谱为HPLC或UPLC。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述MSX衍生的详细过程：向样品中加入Borate Buffer 1，漩涡震荡5-10s混匀，再加入AQC衍生试剂6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯，即刻漩涡震荡5-10s混匀，室温放置1min后于55℃加热10min。 7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于：所述样品、Borate Buffer 1和AQC衍生试剂的体积比为1：7：2。 8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述待测样品溶液的制备过程为：单克隆抗体发酵液经Protein A亲和层析纯化后，使用醋酸调节pH至5.5，使用0.22μm滤膜过滤后作为待测样品用于后续检测。 9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述MSX标准溶液的浓度范围为5-250μmol/L。
所属类别：	发明专利