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原文传递一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法

专利名称：	一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法
摘要：	一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，包括以下步骤：1)在微孔板中加入Ag@Au纳米粒子探针溶液、运行溶液和样品溶液，反应后，将试纸条的样品垫浸没在微孔板内，制作标准比色卡；2)扫描检测线处的拉曼光谱，以拉曼峰值作为纵坐标，人抗新冠病毒S蛋白抗体的浓度作为横坐标，绘制工作曲线；3)检测时，在微孔板中加入Ag@Au纳米粒子探针溶液、运行溶液和样品溶液，反应后通过试纸条与标准比色卡对比，可对人抗新冠病毒S蛋白抗体进行半定量检测；4)使用便携式拉曼光谱仪扫描检测线处的拉曼光谱，以拉曼峰值带入步骤2)的线性方程，即可求得人抗新冠病毒S蛋白抗体浓度。灵敏度高、性能稳定，可快速定性和定量分析。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	中国石油大学(华东)
发明人：	曾景斌;梁鹏辉;温聪颖;郭琦;邢金燕;于剑锋;张丙华
专利状态：	有效
申请日期：	2021-11-29T00:00:00+0800
发布日期：	2022-03-25T00:00:00+0800
申请号：	CN202111435802.1
公开号：	CN114235775A
代理机构：	厦门南强之路专利事务所(普通合伙)
代理人：	张素斌
分类号：	G01N21/65;G01N33/68;G01N33/569;G;G01;G01N;G01N21;G01N33;G01N21/65;G01N33/68;G01N33/569
申请人地址：	266580 山东省青岛市黄岛区长江西路66号
主权项：	1.一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于包括以下步骤： 1)在微孔板中加入Ag@Au纳米粒子探针溶液、运行溶液和已知浓度的样品溶液，常温下反应后，将试纸条的样品垫一端浸没在微孔板内的溶液中，通过试纸条的颜色，制作标准比色卡； 2)使用便携式拉曼光谱仪扫描检测线处的拉曼光谱，以1075cm-1处的拉曼峰值作为纵坐标，人抗新冠病毒S蛋白抗体的浓度作为横坐标，绘制工作曲线，得到线性方程； 3)检测时，在微孔板中加入Ag@Au纳米粒子探针溶液、运行溶液和已知浓度的样品溶液，常温下反应后，将试纸条的样品垫一端浸没在微孔板内的溶液中，通过试纸条与标准比色卡对比颜色，可对人抗新冠病毒S蛋白抗体进行半定量检测； 4)使用便携式拉曼光谱仪扫描检测线处的拉曼光谱，以1075cm-1处的拉曼峰值带入步骤2)的线性方程，即可求得人抗新冠病毒S蛋白抗体浓度。 2.如权利要求1所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于：所述运行溶液为含有1wt％牛血清白蛋白、1wt％Tween-20的pH＝7.4的缓冲溶液。 3.如权利要求1所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在：所述试纸条由PVC基板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水垫组合粘贴合成，其中，在硝酸纤维素膜上使用划膜喷金仪喷涂新冠病毒Spike蛋白作为测试线(T线)和羊抗兔抗体作为质控线(C线)。 4.如权利要求1所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于所述Ag@Au纳米粒子探针的制备方法包括如下步骤： 1)制备拉曼探针分子修饰的Ag纳米粒子； 2)制备Ag@Au纳米粒子； 3)在Ag@Au纳米粒子表面修饰巯基聚乙二醇羧基(HS-PEG-COOH)； 4)以(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活Ag@Au纳米粒子表面羧基，缀合抗体。 5.如权利要求4所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于步骤1)制备拉曼探针分子修饰的Ag纳米粒子包括以下步骤： 1.1)制备Ag种子； 1.2)通过步骤1.1)的Ag种子制备Ag球形纳米粒子； 1.3)将步骤1.2)的Ag球形纳米粒子和4-巯基苯甲酸的乙醇溶液搅拌，即得到拉曼探针分子修饰的Ag纳米粒子。 6.如权利要求4所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于步骤2)制备Ag@Au纳米粒子包括以下步骤： 2.1)将氯金酸溶液、氢氧化钠溶液、亚硫酸钠溶液混合，无光静置即得到生长溶液； 2.2)将拉曼探针分子修饰的Ag纳米粒子、聚乙烯吡咯烷酮溶液、抗坏血酸溶液、氢氧化钠溶液、亚硫酸钠溶液混合； 2.3)将步骤2.2)的混合溶液超声分散后加入生长溶液，然后加热，即得到Ag@Au纳米粒子。 7.如权利要求4所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于：Ag@Au纳米粒子中，所述Ag纳米粒子的直径为27～30nm，Au壳的厚度为2nm。 8.如权利要求4所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于步骤3)在Ag@Au纳米粒子表面修饰巯基聚乙二醇羧基包括以下步骤：称取巯基聚乙二醇羧基用适量水溶解，加入Ag@Au纳米粒子，在一定温度下搅拌，最后洗涤即可。 9.如权利要求4所述的一种基于Ag@Au纳米粒子的新冠病毒抗体检测方法，其特征在于步骤4)缀合抗体包括以下步骤： 4.1)向修饰有巯基聚乙二醇羧基的Ag@Au中加入一定量的(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)激活Ag@Au纳米粒子表面羧基溶液，振荡，离心洗涤； 4.2)向步骤4.1)活化后的溶液加入兔抗人抗体，振荡，洗涤并分散在重悬浮液中。
所属类别：	发明专利