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原文传递血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法

专利名称：	血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法
摘要：	本发明提供血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒及检测方法，包括样本与试剂包A中的试剂A混合，静置，混合后转移至试剂包C中的超滤离心管内超滤，滤液转移至离心管，加入试剂包B中的内标，涡旋混匀，静置，加入试剂包A中的试剂B，涡旋混匀，静置，高速离心。取上清液，冻干，加入试剂包A中的试剂D，涡旋，衍生，并恢复至室温，冻干，加入试剂包A中的试剂C，涡旋，所制备样本上机分析。应用超高效液相色谱质谱联用系统，在C18反相色谱柱上，实现7种游离甾体激素在色谱柱上的分离，经分离的7种游离甾体激素进入质谱系统检测。本发明提供了一种准确高效的血清中7种游离甾体激素同时检测的质谱检测试剂盒及检测方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	浙江;33
申请人：	杭州汉库医学检验所有限公司
发明人：	马良;许佳彬;李承达;章燕露;陈佳;拓文娟
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-26T00:00:00+0800
发布日期：	2022-12-27T00:00:00+0800
申请号：	CN202211173315.7
公开号：	CN115524433A
代理机构：	绍兴市寅越专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	阮成豪
分类号：	G01N30/06;G01N30/60;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/60;G01N30/72
申请人地址：	310000 浙江省杭州市滨江区西兴街道聚工路11号7幢3层、4层
主权项：	1.一种血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于，包括血清样本前处理过程应用试剂的试剂包A，作为校准品、内标及质控使用的试剂包B，作为前处理样本超滤和进样使用的试剂包C，试剂包A中包括试剂A、试剂B试剂C、试剂D，试剂包B包括定量使用的校准品、内标和进行质量控制的质控品，试剂包C包括0.5mL超滤离心管、2mL进样瓶、300μL内衬管。 2.根据权利要求1所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：试剂A为HEPPS缓冲溶液，试剂B为甲基叔丁基醚，试剂C为30％甲醇水，试剂D为盐酸羟胺甲醇溶液。 3.根据权利要求2所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：HEPPS缓冲溶液pH在7.2～7.4之间，浓度为238.3g/L，所述的盐酸羟胺甲醇溶液为盐酸羟胺浓度为0.1mol/L。 4.根据权利要求1所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：试剂包B包括定量使用的校准品、内标和进行质量控制的质控品，校准品由一定浓度的7种激素的混合标准溶液制备而成，浓度控制在S1-S6之间；内标由各激素内标标准物质混合溶液制备而成，浓度为0.5ng/mL；质控品包括低质控和高质控，所述低质控和高质控均为牛血清白蛋白缓冲液中加入7种激素的混合标准溶液制备而成，所述低质控浓度控制在线性S3浓度，所述高质控浓度控制在线性S5浓度。 5.根据权利要求4所述的血清中7种游离甾体激素质谱检测试剂盒，其特征在于：牛血清白蛋白缓冲液中的缓冲液为PBS缓冲液，其pH在7.2～7.4之间,牛血清白蛋白浓度为5％。 6.一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤： (1)血清样本前处理：包括血清样本稀释，超滤，萃取，衍生，所制备的样本作为高效液相色谱质谱分析备用； (2)校准品前处理：将所述(1)血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的游离皮质醇、游离皮质酮、游离11-脱氧皮质醇、游离雄烯二酮、游离脱氢表雄酮、游离脱氢表雄酮硫酸酯、游离睾酮的校准品，前处理方法相同于所述(1)血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用； (3)质控品前处理：将所述(1)血清样本前处理中的血清样本更换为相同体积的质控品，其中质控品包括低质控和高质控，前处理方法同所述(1)血清样本前处理方法，所制备样本作为高效液相色谱质谱分析备用； (4)超高效液相色谱分离：应用超高效液相色谱系统，在C18反相色谱柱上，在特定的流动相组成、流动相梯度、流速、柱温和进样体积条件下，实现7种游离甾体激素在C18反相色谱柱上的分离； (5)串联四级杆质谱检测：经分离的7种游离甾体激素进入质谱系统检测，正离子模式，特定的离子源参数及MRM参数，实现7种游离甾体激素的质谱检测。 7.根据权利要求6所述的一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于：步骤(1)稀释为：移取试剂包A中试剂A与样本加入离心管内，涡旋混匀，恒温静置；超滤为：将该离心管中液体全部转移至试剂包C中的超滤离心管中，进行超滤；萃取为：离心结束后，转移滤液至离心管内，加入试剂包B中的内标，涡旋混匀，室温条件下静置，向上述离心管内加入试剂包A中的试剂B，涡旋，静置后离心；衍生为：移取上清液于离心管中，冻干，冻干(吹干)结束后，于离心管内加入试剂包A中的试剂D，涡旋，衍生，衍生后恢复至室温，冻干，加入试剂包A中的试剂C，涡旋。 8.根据权利要求6所述的一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于：步骤(4)中C18色谱柱为Agilent Proshell 120EC-C18 3.0×50mm 2.7μm；流动相A为0.1％甲酸/水溶液，流动相B为0.1％甲酸/乙腈溶液；流速为0.4mL/min；柱温为40℃；进样量为10μL，流动相梯度： 0-1.5min，A：70-55％、B:30-45％；1.5-2.5min，A：55-45％、B:45-55％；2.5-3min，A：45-0％、B:55-100％；3-4min，A：0％、B:100％；4-4.1min，A：0-70％、B:100-30％；4.1-5min，A：70％、B:30％。 9.根据权利要求6所述的一种血清中7种游离甾体激素质谱检测方法，其特征在于：步骤(5)中毛细管电压500V，锥孔电压30V，脱溶剂温度500℃，脱溶剂气1000L/Hr，锥孔气150L/Hr，离子源温度150℃，采用MRM模式，每个化合物两个离子对，分别用于定性和定量。