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原文传递用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡及其制备方法

专利名称：	用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡及其制备方法
摘要：	本发明公开了一种用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡及其制备方法。所述速测卡包括卡壳和设置在卡壳内的试纸条，试纸条包括PVC底板、依次相连地粘贴在所述PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，卡壳上设置有加样孔和检测区。硝酸纤维素膜上固定有抗PDCoV特异性单克隆抗体形成检测线，结合垫上固定有胶体金标记的抗PDCoV特异性单克隆抗体。通过该速测卡能够实现针对猪粪便样本中PDCoV的检测，只需进行1次加样，反应均在统一条件下进行，具有快速、准确性好、灵敏度高、操作简便等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	江苏省农业科学院
发明人：	李彬;汪伟;李基棕;范宝超;郭容利;周俊明;周金柱;赵永祥;李澧;朱雪蛟
专利状态：	有效
申请日期：	2022-03-01T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-31T00:00:00+0800
申请号：	CN202210197307.X
公开号：	CN115656506A
代理机构：	北京智绘未来专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	郭红燕
分类号：	G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/531;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/531
申请人地址：	210014 江苏省南京市玄武区孝陵卫钟灵街50号
主权项：	1.一种检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，所述免疫层析速测卡包括卡壳和设置在所述卡壳内的试纸条，其特征在于：所述试纸条上固定有抗猪δ冠状病毒的特异性抗体。 2.根据权利要求1所述的检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，其特征在于：所述试纸条包括PVC底板、依次相连地粘贴在所述PVC底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫，所述卡壳上设置有加样孔和检测区。 3.根据权利要求1所述的检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，其特征在于，所述抗猪δ冠状病毒的特异性抗体是能特异性识别并结合猪δ冠状病毒N蛋白的单克隆抗体和/或多克隆抗体。 4.根据权利要求2或3所述的检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，其特征在于：所述抗猪δ冠状病毒的特异性抗体包括固定于所述硝酸纤维素膜上用于形成检测线的第一抗体以及固定于所述结合垫上的胶体金标记的第二抗体。 5.根据权利要求4所述的检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，其特征在于：所述第一抗体是利用保藏在中国典型培养物保藏中心、保藏号为CCTCCNO:C202133的杂交瘤细胞株FL125-33所产生的抗猪δ冠状病毒单克隆抗体，所述第二抗体是利用保藏在中国典型培养物保藏中心、保藏号为CCTCC NO:C202132的杂交瘤细胞株FL125-32所产生的抗猪δ冠状病毒单克隆抗体。 6.根据权利要求4所述的检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡，其特征在于：所述第一抗体的用量为0.4μg～1.2μg，所述第二抗体的用量为5ng～50ng。 7.一种制备用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡的方法，其包括以下步骤： 1)用抗猪δ冠状病毒的特异性第一抗体在硝酸纤维素膜上形成检测线，用羊抗鼠IgG在所述硝酸纤维素膜形成质控线，得到含有所述检测线和所述质控线的硝酸纤维素膜； 2)在结合垫上固定胶体金标记的抗猪δ冠状病毒的特异性第二抗体； 3)组装所述免疫层析速测卡：在PVC底板上依次粘贴设置样品垫、所述结合垫、所述硝酸纤维素膜和吸收垫，其中所述样品垫位于所述结合垫上方且所述结合垫与所述样品垫具有1mm～1.5mm的重叠区，所述硝酸纤维素膜位于所述结合垫下方且所述硝酸纤维素膜与所述结合垫具有1mm～2mm的重叠区，所述吸收垫位于所述硝酸纤维素膜的上方且所述吸收垫与所述硝酸纤维素膜具有1mm～2mm的重叠区，所述样品垫是大小为4mm×15mm的玻璃纤维膜；(4)安装卡壳使得其覆盖住所述试纸条，其中所述卡壳上的加样孔位于所述样品垫上方，所述检测区位于所述硝酸纤维素膜上方使得能露出所述检测线和所述质控线所在的位置。 8.根据权利要求7所述的制备用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡的方法，其特征在于：所述第一抗体和所述第二抗体分别是单克隆抗体。 9.根据权利要求7所述的制备用于检测猪δ冠状病毒的免疫层析速测卡的方法，其特征在于：所述第一抗体是利用保藏在中国典型培养物保藏中心、保藏号为CCTCC NO:C202133的杂交瘤细胞株FL125-33所产生的抗猪δ冠状病毒单克隆抗体，所述第二抗体是利用保藏在中国典型培养物保藏中心、保藏号为CCTCC NO:C202132的杂交瘤细胞株FL125-32所产生的抗猪δ冠状病毒单克隆抗体。