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原文传递心肌纤维化诊断试剂盒、制备方法、使用方法与应用

专利名称：	心肌纤维化诊断试剂盒、制备方法、使用方法与应用
摘要：	本发明公开了一种心肌纤维化诊断试剂盒、制备方法、使用方法与应用。其中，心肌纤维化诊断试剂盒包括：Slit2检测抗体，用于检测血清中Slit2的浓度。Slit2检测抗体能够检测血清中Slit2的浓度，进而可以根据血清中Slit2浓度实现对心肌纤维化的诊断，具有操作便捷、诊断成本低、诊断速度快的特点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州弘大医疗科技有限公司
发明人：	刘云奇;殷胜利
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-23T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-06T00:00:00+0800
申请号：	CN202211168169.9
公开号：	CN115575644A
分类号：	G01N33/68;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/96;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/531;G01N33/535;G01N33/96
申请人地址：	511495 广东省广州市番禺区钟村街市广路钟二路段45号(办公楼、厂房)2栋118房
主权项：	1.一种心肌纤维化诊断试剂盒，其特征在于，包括：Slit2检测抗体，用于检测血清中Slit2的浓度。 2.根据权利要求1所述的心肌纤维化诊断试剂盒，其特征在于，还包括：酶免反应板、校准品、质控品、稀释液、洗涤液、显色液、终止液中的一种或多种。 3.根据权利要求2所述的心肌纤维化诊断试剂盒，其特征在于，所述Slit2检测抗体为HRP标记的Slit2检测抗体；所述酶免反应板包括：酶免板、附着于所述酶免板上经封闭处理后的包被抗体；所述校准品，包括：多个预设质量浓度的Slit2抗原溶液；所述质控品，包括：第一质量浓度的Slit2抗原溶液和第二质量浓度的Slit2抗原溶液，其中，所述第一质量浓度大于所述第二质量浓度；所述稀释液，包括：磷酸盐、BSA、聚乙二醇6000、蔗糖、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.04mol/L，所述BSA的质量百分数为0.1％～5％，所述聚乙二醇6000的质量百分数为0.1％～10％，所述蔗糖的质量百分数为0.1％～10％，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；所述洗涤液，包括：磷酸盐、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.8mol/L，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；所述终止液为硫酸溶液。 4.根据权利要求3所述的心肌纤维化诊断试剂盒，其特征在于，所述多个预设质量浓度的Slit2抗原溶液，包括：500ng/mL的Slit2抗原溶液、250ng/mL的Slit2抗原溶液、125ng/mL的Slit2抗原溶液、62.5ng/mL的Slit2抗原溶液和0ng/mL的Slit2抗原溶液；所述第一质量浓度为300ng/mL浓度，所述第二质量浓度为150ng/mL。 5.一种心肌纤维化诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，包括步骤：提供Slit2检测抗体；制备包含所述Slit2检测抗体的心肌纤维化诊断试剂盒。 6.根据权利要求5所述的心肌纤维化诊断试剂盒的制备方法，其特征在于，所述提供Slit2检测抗体，包括步骤：将NaIO4溶液和乙二醇溶液依次加入到HRP溶液中进行反应，得到反应后的HRP溶液；将Slit2抗体溶于Na2CO3溶液中，再与所述反应后的HRP溶液混合，得到Slit2抗体溶液；将所述Slit2抗体溶液置入透析袋中，在Na2CO3中进行透析，得到标记反应完成的结合物溶液；向所述结合物溶液中依次加入NaBH4和硫酸铵溶液，进行离心处理，得到结合物沉淀；将所述结合物沉淀加入到PBS溶液中进行溶解，并装入透析袋中，在PBS溶液中进行透析，得到标记的Slit2抗体溶液；向标记的Slit2抗体溶液中加入甘油，并用磷酸盐缓冲液稀释，得到Slit2检测抗体。 7.根据权利要求6所述的心肌纤维化诊断试剂盒的制备方法，所述制备包含所述Slit2检测抗体的心肌纤维化诊断试剂盒，包括步骤：将包被抗体附着在酶免反应板上，再对所述包被抗体进行封闭处理，制备酶免反应板；将Slit2抗原加入到第一磷酸盐缓冲液中，配制成多个预设浓度的Slit2抗原溶液，得到校准品，其中，所述第一磷酸盐缓冲液包括：磷酸盐、BSA、聚乙二醇6000、蔗糖、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.04mol/L，所述BSA的质量百分数为0.1％～5％，所述聚乙二醇6000的质量百分数为0.1％～10％，所述蔗糖的质量百分数为0.1％～10％，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；将Slit2抗原加入到第二磷酸盐缓冲液中，配制成第一浓度的Slit2抗原溶液和第二浓度的Slit2抗原溶液，得到质控品，其中，所述第一浓度大于所述第二浓度，所述第二磷酸盐缓冲液包括：磷酸盐、BSA、聚乙二醇6000、蔗糖、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.04mol/L，所述BSA的质量百分数为0.1％～5％，所述聚乙二醇6000的质量百分数为0.1％～10％，所述蔗糖的质量百分数为0.1％～10％，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；配制第三磷酸盐缓冲液，得到稀释液，其中，所述第三磷酸盐缓冲液包括：磷酸盐、BSA、聚乙二醇6000、蔗糖、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.04mol/L，所述BSA的质量百分数为0.1％～5％，所述聚乙二醇6000的质量百分数为0.1％～10％，所述蔗糖的质量百分数为0.1％～10％，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；配制第四磷酸盐缓冲液，得到洗涤液，其中，所述第四磷酸盐缓冲液包括：磷酸盐、吐温-20，其中，所述磷酸盐的物质量的浓度为0.01mol/L～0.8mol/L，所述吐温-20的质量百分数为0.01％～1％；提供显色液；配制硫酸溶液，得到终止液；将所述酶免反应板、所述Slit2检测抗体、所述校准品、所述质控品、所述稀释液、所述洗涤液、所述显色液、所述终止液进行组合，得到心肌纤维化诊断试剂盒；将所述心肌纤维化诊断试剂盒在2℃～8℃的环境中保存。 8.一种心肌纤维化诊断试剂盒的非诊断治疗目的使用方法，其特征在于，包括步骤：采用所述心肌纤维化诊断试剂盒测定血清中Slit2的浓度。 9.根据权利要求8所述的心肌纤维化诊断试剂盒的非诊断治疗目的使用方法，其特征在于，还包括步骤：确定血清中Slit2的浓度与心肌纤维化程度之间的关系；根据所述测定血清中Slit2的浓度，以及血清中Slit2的浓度与心肌纤维化程度之间的关系，确定心肌纤维化程度；其中，所述确定血清中Slit2的浓度与心肌纤维化程度之间的关系，包括步骤：连续采集行心肌瓣膜手术患者的外周血样本和心房组织样本，根据心电图分为心房颤动组和非心房颤动组，采集健康志愿者的外周血样；对心房组织进行Masson胶原三染色，确定各个所述外周血样对心肌纤维化程度；采用心肌纤维化诊断试剂盒测定所述患者的外周血样本和所述健康志愿者的外周血样的Slit2的浓度，得到对应于外周血样的多个Slit2的浓度；根据所述多个Slit2的浓度和所述外周血样对应的心肌纤维化程度，确定血清中Slit2的浓度与心肌纤维化程度之间的关系；所述血清中Slit2的浓度与心肌纤维化程度之间的关系包括：所述血清中Slit2的浓度小于7μg/mL对应为第一程度的心肌纤维化，所述血清中Slit2的浓度为7～10μg/mL对应为第二程度的心肌纤维化，所述血清中Slit2的浓度大于10μg/mL对应为第三程度的心肌纤维化，所述第一程度的心肌纤维化、第二程度的心肌纤维化、第三程度的心肌纤维化对应的心肌纤维化程度依次递增。 10.一种Slit2抗体在制备心肌纤维化诊断试剂盒中的应用。