详情

原文传递白及的检测方法、白及对照提取物的制备及其应用

专利名称：	白及的检测方法、白及对照提取物的制备及其应用
摘要：	本发明公开了一种白及的检测方法、白及对照提取物的制备及其应用，该应用是通过制备白及对照提取物，利用白及对照提取物建立白及UPLC指纹图谱及含量测定的测定方法。共标定了17个共有峰，以主成分分析（PCA）得到对照提取物四个化合物，累计方差贡献率为83.709%，可在较大程度上反映白及药材或饮片的信息。同时，以所建立的UPLC指纹图谱条件进行白及药材及饮片的含量测定，与单一对照品进行含量测定结果相比无显著差异性，且经方法学考察，证明本方法重现性、精密度、稳定性、加样回收率及线性关系良好，可用于白及药材及饮片的含量测定。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	贵州;52
申请人：	贵州中医药大学
发明人：	刘刚;刘育辰;刘金梅;穆开朗
专利状态：	有效
申请日期：	2022-09-20T00:00:00+0800
发布日期：	2023-01-06T00:00:00+0800
申请号：	CN202211146389.1
公开号：	CN115575551A
代理机构：	北京联创佳为专利事务所(普通合伙)
代理人：	张梅
分类号：	G01N30/06;G01N30/02;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/02;G01N30/86
申请人地址：	550025 贵州省贵阳市贵安新区花溪大学城栋青南路
主权项：	1.一种白及对照提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：取白及药材，粉碎，精密称定4.0~6.0g，以乙醇作为溶剂，料液比0.5~1.5g:30~50mL，超声，滤过，减压浓缩药液，置水浴锅上挥干溶剂得浸膏；将浸膏与PRP-512B型反相树脂上柱，依次以水、20%乙醇、40%乙醇进行梯度洗脱，收集40%乙醇段流分，减压浓缩干燥，得白及对照提取物。 2.根据权利要求1所述白及对照提取物的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：取白及药材，粉碎，过三号筛，精密称定5.0g，以55%乙醇作为溶剂，料液比1g:40mL，超声56 min，超声功率344 W，超声频率40KHz，滤过，减压浓缩药液，置水浴锅上挥干溶剂得浸膏；将浸膏与PRP-512B型反相树脂充分混匀后干法上柱或将浸膏溶于纯水中充分溶解后湿法上样，依次以3个柱体积的水、2个柱体积的20%乙醇、3个柱体积的40%乙醇进行梯度洗脱，收集40%乙醇段流分，减压浓缩干燥，得白及对照提取物。 3.一种白及的检验方法，其特征在于：对白及进行提取，得提取溶液，所述检测方法包括指纹图谱及含量测定方法，所述指纹图谱及含量测定方法包括对提取溶液中dactylorhin A、gymnoside I、gymnoside Ⅲ、militarine的指纹图谱及含量测定。 4.根据权利要求3所述白及的检验方法，其特征在于：所述dactylorhin A、gymnosideI、gymnoside Ⅲ、militarine的指纹图谱及含量测定按照以下步骤进行：（1）供试品溶液的制备：取白及饮片样品，粉碎，精密称定0.1~0.3 g，置于具塞锥形瓶中，加入40~60%乙醇5~15mL，塞紧瓶盖后，称定重量，超声提取，放冷后，称定，用乙醇补足损失，摇匀，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得；（2）白及对照提取物溶液的制备：精密称取白及对照提取物4.50~5.50 mg，置10 mL容量瓶中，加乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照提取物溶液；（3）混合对照品溶液的配制：分别精密称取dactylorhin A、gymnoside I、gymnosideⅢ、militarine对照品适量，加乙醇溶解，配制成混合对照品溶液；（4）色谱条件：色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1x100mm，1.8μm)；流动相A为0.05%磷酸水溶液，流动相B为乙腈；进行梯度洗脱；进样量2 μL；流速0.15 mL/min；柱温35℃；检测波长220 nm；（5）含量测定法：分别吸取白及对照提取物溶液、供试品溶液和混合对照品溶液，注入UPLC高效液相色谱仪，分别采用白及对照提取物法和单体对照品法计算样品中的dactylorhin A、 gymnoside I、 gymnoside Ⅲ、militarine4个成分的含量; （6）militarine作为《中国药典》2020年版评价白及质量的指标性成份，其峰面积较大，峰形较好，比较稳定，所以选择militarine作为参照峰，计算各共有峰的相对保留时间及相对峰面积，共有峰峰面积数据导入IBM SPSS Statistics 26软件，以降维因子对白及饮片样品进行主成分分析，根据特征值和累计贡献率，建立白及UPLC指纹图谱。 5.根据权利要求4所述白及的检验方法，其特征在于：步骤（1）中，所述供试品溶液的制备：取白及饮片样品，粉碎后过四号筛，精密称定0.2 g，置于具塞锥形瓶中，加入50%乙醇10mL，塞紧瓶盖后，称定重量，超声提取30 min，超声功率400 W，频率40 kHz，放冷后，称定，用50%乙醇补足损失，摇匀，0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。 6.根据权利要求4所述白及的检验方法，其特征在于：步骤（2）中，所述白及对照提取物溶液的制备：精密称取白及对照提取物5.12 mg，置10 mL容量瓶中，加50%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得对照提取物溶液。 7.根据权利要求4所述白及的检验方法，其特征在于：步骤（3）中，所述混合对照品溶液的配制：分别精密称取dactylorhin A、gymnoside I、gymnoside Ⅲ、militarine对照品适量，加50%乙醇溶解，配制成质量浓度分别为0.2004 mg/mL、0.4000 mg/mL、0.1050 mg/mL、1.2100 mg/mL的混合对照品溶液。 8.根据权利要求4所述白及的检验方法，其特征在于：步骤（4）中，所述梯度洗脱程序为：0~2min，18%~20%B；2~3 min，20%~20%B；3~6 min，20%~22%B；6~7 min，22%~23%B；7~9min，23%~24%B；9~12 min，24%~26%B；12~16 min，26%~28%B；16~20 min，28%~100%B；20~24min，100%~100%B。 9.根据权利要求1或2所述白及对照提取物在制备止血药物中的应用。