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原文传递一种水蛭抗凝活性检测滴定方法及系统

专利名称：	一种水蛭抗凝活性检测滴定方法及系统
摘要：	本发明属于抗凝活性检测技术领域，公开了一种水蛭抗凝活性检测滴定方法及系统，采用改进的原凝血酶滴定法进行吸血水蛭品种抗凝活性的测量；采用原凝血酶滴定法或白瓷板滴定法对抗凝活性较低、凝血酶溶液浓度较小的水蛭品种进行抗凝活性的测量。吸血水蛭品种抗凝活性的测量还包括：利用减少单次进样量、降低凝血酶溶液浓度的白瓷板滴定法进行吸血水蛭品种抗凝活性的测量。本发明采用改进的原凝血酶滴定法对吸血水蛭品种抗凝活性的测量，采用白瓷板滴定法对凝活性较低，实验中凝血酶溶液浓度较小的水蛭品种进行抗凝活性的测量；同时利用两种进行互相验证，提高了测定结果的准确性与稳定性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	云南;53
申请人：	华治医药(云南)有限公司
发明人：	王文祎;赵卫涛;杨金申
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202310999550.8
公开号：	CN117129677A
代理机构：	成都知棋知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	马晓静
分类号：	G01N33/573;G01N1/28;G;G01;G01N;G01N33;G01N1;G01N33/573;G01N1/28
申请人地址：	650101 云南省昆明市高新区云南软件园A座701室
主权项：	1.一种水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，包括：滴定过程中反应容器采用玻璃液相进样瓶；利用减少单次凝血酶溶液进样量、改进滴定操作过程中的步骤简化滴定终点判断的难度；以药典和地方标准凝血酶滴定法与白瓷板滴定法抗凝活性测量结果平均数作为最终检验结果。 2.如权利要求1所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，所述水蛭抗凝活性检测滴定方法包括以下步骤：步骤一，首先判断待测水蛭样品是否为吸血品种，再根据其是否吸血按照中国药典或地方标准确定取样量，称定待测水蛭样品；加入0.9％氯化钠溶液；超声提取30分钟，过滤，取续滤液作为供试品溶液；步骤二，取供试品溶液，并分别利用改进的凝血酶滴定法、白瓷板滴定法进行抗凝活性测定；步骤三，综合凝血酶滴定法、白瓷板滴定法的抗凝活性测定结果，取测定数值平均值作为最终抗凝活性检测结果。 3.如权利要求2所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，所述分别向所述水蛭样品中加入0.9％氯化钠溶液包括：取1g宽体金线蛭、尖细金线蛭、日本医蛭药材粉末加入5ml的0.9％氯化钠溶液；取0.5g的菲牛蛭药材粉末加入15ml的0.9％氯化钠溶液；取0.25g的菲牛蛭冻干粉加入15ml的0.9％氯化钠溶液。 4.如权利要求2所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，所述利用改进的药典和标准凝血酶滴定法进行抗凝活性测定包括：精密量取供试品溶液100μl于反应容器中，反应容器由原来的的圆底试管或塑料材质的试管改为玻璃材质的平底液相进样小瓶，加入含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基盐酸缓冲液200μl，摇匀，置水浴中于37℃±0.5℃下温浸5min，滴加凝血酶溶液，其中吸血品种的凝血酶溶液浓度设置为40U/ml，每次进样量为3μl；不吸血品种的凝血酶溶液浓度设置为10U/ml，每次进样量为2μl；边滴加边轻轻摇匀，并将所述玻璃液相进样瓶呈一定角度倾斜放置至凝固或有凝固物出现，记录消耗凝血酶溶液的体积，计算抗凝活性。 5.如权利要求2所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，所述利用白瓷板滴定法进行抗凝活性测定包括：将白瓷点滴板浸于37℃水浴中，精密加入供试品溶液100μl与含0.5％纤维蛋白原的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液200μl，用搅拌针轻轻搅动摇匀，滴加凝血酶溶液，凝血酶溶液浓度依据待测样品是否为吸血品种与凝血酶滴定法规定设置相同，进样量则统一设置为每次2μl，滴加后用搅拌针轻轻搅动摇匀，以最后加入凝血酶溶液混匀反应1分钟后，用搅拌针能挑到丝状或块状凝固物为滴定终点，记录消耗凝血酶溶液的体积，计算抗凝活性。 6.如权利要求2所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，凝血酶溶液滴加频率与药典标准方法一致，即不吸血的宽体金线蛭、尖细金线蛭药材每4min滴加一次；吸血的日本医蛭、菲牛蛭药材、菲牛蛭冻干粉每1min滴加一次。 7.如权利要求2所述水蛭抗凝活性检测滴定方法，其特征在于，所述抗凝活性计算公式如下： U＝C1V1/C2V2 其中，U表示每1g样品含抗凝血酶活性单位，中和一个单位的凝血酶的量，为一个抗凝血酶活性单位；C1表示凝血酶溶液的浓度；C2表示供试品溶液的浓度；V1表示消耗凝血酶溶液的体积；V2表示供试品溶液的加入量表示；利用此公式分别计算凝血酶滴定法和白瓷板滴定法的检测数值，并将其取平均数作为最终检测结果。 8.一种水蛭抗凝活性检测滴定系统，其特征在于，包括：样品识别与采样模块：用于判断待测水蛭样品是否为吸血品种，并根据结果按照中国药典或地方标准确定取样量；需要的设备包括水蛭分类识别设备，精确的电子天平；样品处理模块：在确认取样量后，需要将样品加入0.9％的氯化钠溶液，然后进行超声提取30分钟，最后过滤，取续滤液作为供试品溶液；需要的设备包括超声提取设备，过滤设备；抗凝活性测定模块：这个模块的主要任务是利用改进的凝血酶滴定法和白瓷板滴定法分别对供试品溶液进行抗凝活性测定；需要的设备包括滴定设备，白瓷板；数据处理模块：根据测定结果，计算凝血酶滴定法和白瓷板滴定法的平均值，作为最终的抗凝活性检测结果；需要的设备包括计算机或其他具有数据处理功能的设备。