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原文传递碱性磷酸酶活性便携式电泳滴定检测方法

专利名称：	碱性磷酸酶活性便携式电泳滴定检测方法
摘要：	一种碱性磷酸酶活性便携式电泳滴定检测方法及装置，通过在碱性磷酸酶催化‑电泳滴定系统中进行电泳滴定碱性磷酸酶标准品，获得不同活性碱性磷酸酶与对应的界面速度之间的标准曲线；然后在相同条件通过ALP‑ET电泳滴定测定未知碱性磷酸酶活性的样品界面速度，通过对比ALP‑ET标准曲线获得样品中ALP活性。本发明无需复杂的检测仪，简便易携带，能够在10分钟内通过少量样品分析直接用肉眼读出ALP活性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	上海;31
申请人：	上海交通大学
发明人：	曹成喜;曹馨予;孔凡志;钟冉;张强;肖华
专利状态：	有效
申请日期：	2018-04-09T00:00:00+0800
发布日期：	2019-10-22T00:00:00+0800
申请号：	CN201810309736.5
公开号：	CN110361440A
代理机构：	上海交达专利事务所
代理人：	王毓理;王锡麟
分类号：	G01N27/447(2006.01);G;G01;G01N;G01N27
申请人地址：	200240 上海市闵行区东川路800号
主权项：	1.一种碱性磷酸酶活性便携式电泳滴定检测方法，其特征在于，通过在碱性磷酸酶催化-电泳滴定系统中进行电泳滴定碱性磷酸酶标准品，获得不同活性碱性磷酸酶与对应的界面速度之间的标准曲线；然后在相同条件通过ALP-ET电泳滴定测定未知碱性磷酸酶活性的样品界面速度，通过对比ALP-ET标准曲线获得样品中ALP活性；所述的ALP-ET系统包括：ALP-ET芯片、检测电极、电源和LED紫外灯，其中：ALP-ET芯片包括：微通道以及位于微通道两端的阳极孔和阴极孔，所述的检测电极分别设置于阳极孔和阴极孔内，所述的微通道内设有凝胶。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的ALP-ET芯片包括：依次设置于基座上的密封层和通道层，该通道层包括：阳极室、阴极室、可视刻度以及连接两室的通道。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征是，当所述的凝胶采用琼脂糖凝胶时，质量体积浓度为0.5％～2.5％；当所述的凝胶采用聚丙烯酰胺凝胶时，质量体积浓度为5.0％～25.0％，交联度为2.5％～7.5％。 4.根据权利要求1或3所述的方法，其特征是，所述的凝胶内含酸性缓冲溶液与背景电解质的混合溶液。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的阳极孔内含酸性缓冲液与背景电解质的混合溶液。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的碱性磷酸酶催化是指：将将已知或未知活性的碱性磷酸酶、反应缓冲液、反应底物加入ALP-ET芯片的阴极孔中，在室温下孵育形成以下催化反应：其中：4-MUP为4-甲基伞形酮磷酸酯二钠盐；[4-MU]-为4-甲基伞形酮碱性盐，在紫外光照射下发出强烈蓝色荧光。 7.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的电泳滴定是指：通过电源向阴极孔和阳极孔施加电场，阴极孔中的[4-MU]-在电场作用下向阳极移动，并与芯片微通道中的酸性缓冲液发生中和反应，生成无荧光的4-MU，从而形成荧光MRB界面：该MRB界面的实验移动速度其中：l1和l2分别为t1和t2时间内MRB界面移动的距离。 8.根据权利要求6所述的方法，其特征是，所述的反应缓冲液为碱性碳酸盐或Tris或二乙醇胺缓冲液；所述的反应底物和催化产物分别为4-甲基伞形酮磷酸酯二钠盐(4-MUP)和4-甲基伞形酮碱性盐([4-MU]-)。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的标准曲线是指：ALP的活性即CALP＝a vMRB–b，其中：a和b分别为标准曲线的斜率与截距，vMRB为荧光界面移动速度，单位为mm/min，Δten为ALP催化时间，；通过检测不同ALP标准品活性及其对应的MRB移动速度，测得斜率a和截距b，而获得ALP活性与MRB移动速度之间的标准曲线；MRB界面移动的理论速度其中：vMRB为MRB界面移动速度(mm/min)，cMU和vMU分别为[4-MU]-的浓度(mol/L)和移动速度(m/s)，和分别为H+成分浓度(mol/L)和成分移动速度(m/s)。 10.根据权利要求9所述的方法，其特征是，所述的对比ALP-ET标准曲线是指：根据待测样品的MRB界面，通过CALP＝a vMRB–b获得待测血清样品的ALP活性，其中vMRB即为MRB移动速度V。 11.一种碱性磷酸酶-电泳滴定系统，其特征在于，包括：ALP-ET芯片、检测电极、电源和LED紫外灯，其中：ALP-ET芯片包括：微通道以及位于微通道两端的阳极孔和阴极孔，所述的检测电极分别设置于阳极孔和阴极孔内，所述的微通道内设有凝胶。
所属类别：	发明专利