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原文传递一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法

专利名称：	一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法
摘要：	本发明涉及一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，将4‑羟基苯基磷酸钠(4‑HPP)作为底物，在水溶液中，该底物分子经碱性磷酸酶的催化水解生成1,4‑苯二酚(HQ)，1,4‑苯二酚可以与后续加入的3‑(2‑氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷(DAMO)发生反应，生成绿色荧光发射的硅纳米粒子(SiNPs)。体系中的碱性磷酸酶活性越高，生成的荧光硅纳米粒子就越多，荧光强度就越大，根据检测溶液的荧光强度变化，进行碱性磷酸酶活性的定量分析检测。与现有技术相比，本发明所需试剂药品简单易得，操作方便，快速准确，为临床样品中碱性磷酸酶活性定量检测提供了一种灵敏可靠的方法。本发明的荧光检测方法，检出限为0.1mU/mL，具有高灵敏度，高选择性，宽线性范围等优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	中国科学院长春应用化学研究所
发明人：	孙健;杨秀荣;刘国永;赵佳会;卢沙沙
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910795469.1
公开号：	CN110501317A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	周蕾
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	130022 吉林省长春市朝阳区人民大街5625号
主权项：	1.一种碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将4-羟基苯基磷酸钠水溶液分别与不同已知活性的碱性磷酸酶标准溶液在缓冲溶液中混合孵育，得到一系列混合溶液；步骤二：在步骤一制备的一系列混合溶液中分别加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试；步骤三：利用碱性磷酸酶标准溶液活性和荧光光谱强度的线性关系，绘制标准曲线；步骤四：将4-羟基苯基磷酸钠水溶液与待测碱性磷酸酶溶液在缓冲溶液中混合孵育，得到待测碱性磷酸酶混合溶液；步骤五：在步骤四制备的待测碱性磷酸酶混合溶液中加入3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试，得到待测碱性磷酸酶的荧光光谱强度；步骤六：利用步骤三的标准曲线及步骤五测得的荧光光谱强度，计算得到待测碱性磷酸酶的活性。 2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，碱性磷酸酶标准溶液的活性范围为：0～50mU/mL。 3.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中4-羟基苯基磷酸钠水溶液的浓度为0.1～1.5mM。 4.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中缓冲溶液是pH＝7.5～10.5的10～100mM Tris-HCl溶液，并含有MgCl2浓度为20～500μM。 5.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤一和四中孵育温度为20～37℃，时间为10～90min。 6.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤二和五中3-(2-氨基乙基氨基)丙基三甲氧基硅烷水溶液的浓度为质量分数1％～5％。 7.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶活性的荧光检测方法，其特征在于，步骤二和五中孵育温度为20～37℃，时间为20～120min。
所属类别：	发明专利