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原文传递一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法

专利名称：	一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法
摘要：	本发明涉及一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，将对氨基苯磷酸作为底物，在水溶液中，该底物分子经碱性磷酸酶的催化水解生成对氨基苯酚，对氨基苯酚可以与后续加入的乙二胺发生反应，生成强荧光发射的聚合物碳点。体系中的碱性磷酸酶活性越高，生成的荧光聚合物碳点就越多，荧光就越强，根据检测溶液的荧光强度变化，进行碱性磷酸酶活性的定量检测。本发明的方法能够对碱性磷酸酶活性进行荧光定量检测，检出限为0.1mU/mL，具有灵敏度高，抗干扰能力强，线性关系优异等优点。本发明所用试剂简单易得，操作简便，重复性好，为临床样品中碱性磷酸酶活性的定量检测提供了一种灵敏有效且准确度高的荧光方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	吉林;22
申请人：	中国科学院长春应用化学研究所
发明人：	孙健;杨秀荣;刘国永;邢志财
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-26T00:00:00+0800
申请号：	CN201910795750.5
公开号：	CN110501318A
代理机构：	长春众邦菁华知识产权代理有限公司
代理人：	周蕾
分类号：	G01N21/64(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	130022 吉林省长春市朝阳区人民大街5625号
主权项：	1.一种检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将对氨基苯磷酸水溶液分别与不同已知活性的碱性磷酸酶标准溶液在缓冲溶液中混合孵育；步骤二：在步骤一制备的混合溶液中分别加入乙二胺水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试；步骤三：利用碱性磷酸酶标准溶液活性和荧光光谱强度的线性关系，绘制标准曲线；步骤四：将对氨基苯磷酸水溶液与待测碱性磷酸酶溶液在缓冲溶液中混合孵育；步骤五：在步骤四制备的混合溶液中加入乙二胺水溶液，进一步混合孵育，进行荧光光谱测试，得到待测碱性磷酸酶溶液的荧光光谱强度；步骤六：利用步骤三的标准曲线及步骤五测得的荧光光谱强度，计算得到待测碱性磷酸酶活性。 2.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，碱性磷酸酶标准溶液的活性为：0～70mU/mL。 3.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤一和四中对氨基苯磷酸水溶液的浓度为0.25～6.25mM。 4.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤一和四中缓冲溶液是pH＝8.0～11.0的10～100mM Tris-HCl溶液，并含有MgCl2浓度为0.1～5mM。 5.根据权利要求4所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，缓冲溶液是pH＝10.0，对氨基苯磷酸水溶液的浓度为2.5mM。 6.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤一和四中孵育温度为20～37℃，时间为10～90min。 7.根据权利要求6所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤一和四中孵育温度为37℃，时间为60min。 8.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤二和五中乙二胺水溶液的浓度为100～1000mM。 9.根据权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤二和五中孵育温度为20～37℃，时间为20～180min。 10.根据权利要求9所述的检测碱性磷酸酶活性的荧光方法，其特征在于，步骤二和五中孵育温度为37℃，时间为120min。
所属类别：	发明专利