详情

原文传递一种人纤维蛋白原降解产物DR-70测定试剂盒及其制备方法

专利名称：	一种人纤维蛋白原降解产物DR-70测定试剂盒及其制备方法
摘要：	本发明提供一种人纤维蛋白原降解产物DR‑70测定试剂盒，所述试剂盒包括：试剂M、试剂R1、试剂R2、校准品和质控品；其中，所述试剂M含包被链霉亲和素的磁微粒；所述试剂R1含生物素化的DR‑70单克隆抗体；所述试剂R2含标记吖啶酯的DR‑70单克隆抗体。所述校准品和质控品为含有不同浓度人纤维蛋白原降解产物DR‑70的抗原稀释液。本发明制备的试剂盒实现了磁微粒粒径的缩小，从而优化试剂盒的最低检测线，避免因磁微粒的粒径增大带来固相载体总表面积下降，进而导致结合在载体上的蛋白量下降等问题；提高DR‑70检测的灵敏度同时还扩大了DR‑70检测的线性范围。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	湖南;43
申请人：	湖南菲科生物技术有限公司
发明人：	李海军;吴盼
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-14T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311014669.1
公开号：	CN117031026A
代理机构：	武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙)
代理人：	方菲
分类号：	G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573;G01N33/543;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/53;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573;G01N33/543;G01N33/531;G01N33/532;G01N33/53
申请人地址：	410000 湖南省长沙市开福区青竹湖街道金霞智慧城2栋4楼、5楼
主权项：	1.一种人纤维蛋白原降解产物DR-70测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：试剂M、试剂R1、试剂R2、校准品和质控品；其中，所述试剂M含包被链霉亲和素的磁微粒，且磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：(0.1～1.0)，磁微粒粒径为0.2～3.0μm；所述试剂R1含生物素化的DR-70单克隆抗体，且生物素与DR-70单克隆抗体的质量比为(1～5)：1；所述试剂R2含标记吖啶酯的DR-70单克隆抗体，且DR-70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(2～8)：1；所述校准品和质控品为含有不同浓度人纤维蛋白原降解产物DR-70的抗原稀释液。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂M中磁微粒与链霉亲和素的质量比为3：(0.3～1.0)，磁微粒粒径为1.0～3.0μm；所述试剂R1中生物素与DR-70单克隆抗体的质量比为3：1；所述试剂R2中DR-70单克隆抗体与吖啶酯质量比例为(4～8)：1。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂M、所述试剂R1的组分还包括：pH为5.0～8.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐10.0～50.0g/L、表面活性剂1.0～50.0g/L、保护剂100.0～600.0g/L、防腐剂1.0～10.0g/L；所述试剂R2的组分还包括：pH为6.0～9.0的缓冲液5.0～50.0g/L、无机盐1.0～30.0g/L、表面活性剂1.0～10.0g/L、保护剂50.0～200.0g/L、防腐剂1.0～2.0g/L。 4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、MES缓冲液、Gly缓冲液、Tris-HCl缓冲液；所述无机盐为NaCl、KCl、KH2PO4、CaCl2、MgCl2中的至少一种；所述表面活性剂为吐温-20、EDTA二钠、甘油、吐温-80中的至少一种；所述保护剂为蔗糖、BSA、酪蛋白中的至少一种；所述防腐剂为Proclin系列防腐剂、叠氮化钠、山梨酸钾中的至少一种。 5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括预激发液、激发液。 6.一种如权利要求1-5任一项所述试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、试剂M的制备：取磁微粒置于包被缓冲液中，加入EDC，混匀，外加磁场集磁去除上清液，再加入缓冲液，混匀，得活化磁微粒溶液；取链霉亲和素置于包被缓冲液中，混匀，加入上述活化磁微粒溶液，混匀，外加磁场集磁去除上清液，加入终止缓冲液Ⅰ，混匀，得包被链霉亲和素的磁微粒溶液；将包被链霉亲和素的磁微粒溶液外加磁场集磁去除上清液，加入清洗液，混匀，外加磁场集磁去除上清液，加入保存缓冲液，混匀，即得试剂M；其中，包被缓冲液为MES缓冲液；终止缓冲液Ⅰ由磷酸盐缓冲液、Gly缓冲液、保护剂、表面活性剂、防腐剂混合制备而成；清洗液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂混合制备而成；保存缓冲液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成； S2、试剂R1的制备：将生物素置于磷酸盐缓冲液中，加入DR-70单克隆抗体，混匀，于18～30℃避光反应30min；反应结束后进行透析，透析完成后加入甘油，过滤，加入R1稀释液，即得试剂R1；其中，R1稀释液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成； S3、试剂R2的制备：取吖啶酯置于标记缓冲液中，加入DR-70单克隆抗体，混匀，在18～30℃条件下避光反应30min；反应结束后加入终止缓冲液Ⅱ，混匀，在18～30℃条件下避光反应30min；将反应产物进行透析，透析完成后加入甘油，过滤，加入R2稀释液，即得试剂R2；其中，标记缓冲液由磷酸盐缓冲液、无机盐混合制备而成；终止缓冲液Ⅱ由磷酸盐缓冲液、Gly缓冲液、无机盐混合制备而成； R2稀释液由磷酸盐缓冲液、无机盐、表面活性剂、保护剂、防腐剂混合制备而成。 7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述EDC溶液浓度为1mg/mL。 8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述甘油加入量与透析后溶液体积比为0.5：1；步骤S3中所述甘油加入量与透析后溶液体积比为1：1；步骤S2、S3中所述过滤为经过0.22μm滤膜过滤。 9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中透析条件：10mM磷酸盐缓冲液作为透析液在2～8℃进行透析，每2h更换一次透析液，共透析4次；步骤S3中透析条件：透析液由磷酸盐缓冲液、无机盐混合制备而成，温度2～8℃，每2h更换一次透析液，共透析4次。