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原文传递一种醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法

专利名称：	一种醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法
摘要：	本发明公开一种醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，具体地，所述柱前衍生化方法包括：以含增强质谱响应基团的2，3‑环氧丙基类化合物作为衍生化试剂，其中的2，3‑环氧丙基与醇或酚类化合物中的醇羟基或酚羟基进行开环加成，得到衍生化产物。本发明利用含增强质谱响应基团(例如铵基、脂肪胺、芳香胺)的2，3‑环氧丙基类化合物，作为柱前衍生化试剂，在温和条件下与醇或酚类化合物中的醇羟基或酚羟基进行完全充分的反应，衍生化方法过程简单易行，得到含有增强质谱响应基团的衍生化产物，提高检测的准确度和灵敏度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州方昆医药科技有限公司
发明人：	姜金方;陈云辉
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-16T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311034223.5
公开号：	CN117110467A
代理机构：	北京金信知识产权代理有限公司
代理人：	李维盈
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
申请人地址：	215123 江苏省苏州市苏州工业园区福泾田路68号A幢503
主权项：	1.一种醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其包括：以含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物作为衍生化试剂，其中的2,3-环氧丙基与醇或酚类化合物中的醇羟基或酚羟基进行开环加成，得到衍生化产物。 2.根据权利要求1所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，所述醇或酚类化合物为甾醇、脂肪醇或芳香酚；优选地，所述甾醇选自双炔失碳醇、雄酮、去氢表雄酮、睾酮、雄甾酮、二氢睾酮、四氢孕酮、别孕烯醇酮、孕烷醇酮、epiallopregnanolone、羟基甾醇、雷公藤甲素中的一种或多种；优选地，所述脂肪醇为ALC-0315；优选地，所述芳香酚选自炔雌醇、雌酮、雌二醇中的一种或多种；优选地，所述醇或酚类化合物为双炔失碳醇、炔雌醇中的一种或其组合。 3.根据权利要求1所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，所述含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物的结构为：其中R中包含能够增强质谱响应基团； R优选为含N结构，选自其中，各个R’独立地为C1-C3烷基，优选为甲基；各个R”独立地选自C1-C3烷基(例如甲基、乙基、丙基)、C6-C10芳香基(例如苯基、萘基)，或两个相邻的R”与共同连接的N形成5-15元杂环，所述5-15元杂环中含一个或多个选自N、O、S的杂原子，优选地，所述5-15元杂环选自吡咯、噻唑、咪唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲哚、喹啉、蝶啶、吖啶；更优选地，所述含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物为三甲基氯化铵，其结构为 4.根据权利要求1所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，所述醇或酚类化合物的羟基与含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物进行摩尔比为1∶1，或n∶1的定量反应，其中n为2～10的整数，优选2～6的整数。 5.根据权利要求1所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，所述化学衍生化方法包括：含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物与醇或酚类化合物，在碱性水溶液中，于40～60℃下进行衍生化反应；优选地，所述碱性可以由氢氧化钠提供，碱性水溶液的pH值为10-12；优选地，所述衍生化反应的温度为40～50℃；优选地，所述反应的时间为2～3h；优选地，所述化学衍生化方法还包括，在衍生化反应完成后，通过调节pH值至中性以终止反应；优选地，使用酸调节pH；优选地，使用0.5～2M的盐酸调节pH。 6.根据权利要求1所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，使用所述柱前化学衍生化方法的样品为生物样品，优选血浆、组织匀浆液、尿液、粪便匀浆液、细胞组分或亚细胞组分孵育液。 7.根据权利要求6所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法，其特征在于，以血浆为生物样品的柱前化学衍生化方法包括以下步骤： (1)取含醇或酚类化合物的血浆样品，加入有机溶剂，沉淀蛋白； (2)离心，取上清液，去除上清液中的有机溶剂； (3)在去除有机溶剂的残留物种中加入氢氧化钠水溶液和含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物，于碱性条件、水浴30～60℃下，孵育1～5h； (4)加酸溶液调节pH至中性终止衍生化反应；优选地，步骤(1)中：所述有机溶剂选自乙腈、甲醇中的一种或其组合，优选为乙腈；或所述加入有机溶剂的量为血浆体积的2～3倍；或在向血浆样品中加入乙腈之前，加入内标物质，所述内标物质为所述醇或酚类化合物的结构类似物或氘代化合物；优选地，步骤(2)中：所述去除上清液中的有机溶剂的方法为：在30～50℃，优选40℃条件下于氮气流下吹干；优选地，步骤(3)中：所述碱性条件的pH值为10-12；或加入所述含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物的量是定量反应所需摩尔量的20倍以上，优选100倍以上，进一步优选500倍以上，更优选1000倍以上；或所述水浴温度为40～60℃，优选为40～50℃；孵育时间为2～3h；优选地，步骤(4)中，使用盐酸溶液调节pH至中性，优选地，盐酸溶液浓度为0.5～2M；优选地，以血浆为生物样品的化学衍生化方法中，在衍生化反应完成后，进行LC-MS/MS分析前，还包括使用适当稀释剂稀释衍生化反应液；优选地，稀释剂为甲醇水溶液，其中甲醇水的比例为1∶0.5～2，优选为1∶1。 8.一种化学衍生化LC-MS/MS法定量检测血浆中醇或酚类化合物的方法，其包含权利要求1-7任一项所述的醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法。 9.根据权利要求8所述的化学衍生化LC-MS/MS法定量检测血浆中醇或酚类化合物的方法，其特征在于，采用内标法对醇或酚类化合物进行定量分析；或所述醇或酚类化合物为双炔失碳醇或炔雌醇；所述含增强质谱响应基团的2,3-环氧丙基类化合物为三甲基氯化铵(GTMA)；或所述血浆中醇或酚类化合物的柱前化学衍生化方法如权利要求中所述。 10.根据权利要求8所述的化学衍生化LC-MS/MS法定量检测血浆中醇或酚类化合物的方法，其特征在于，化学衍生化LC-MS/MS法定量检测血浆中双炔失碳醇的方法中：色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱温为室温，流动相中A相为：5mM醋酸铵溶液，含0.1％甲酸；B相为乙腈；流速为：0.5mL/min；梯度洗脱程序为：0-0.5min：A/B为70∶30，v/v；0.5-1.2min：A/B由70∶30至15∶85；1.2-2.2min：A/B保持15∶85；2.2-2.3：A/B由15∶85至70∶30；2.3-5.8min：A/B保持70∶30； MS/MS条件为： ES1正离子扫描模式；参数如下：电喷雾电压，5500V；气帘气，30psi；Gas1，50psi；Gas2，50psi；源温度，450℃，滞留时间，200ms；或者，化学衍生化LC-MS/MS法定量检测血浆中炔雌醇的方法中：色谱条件为：色谱柱为C18柱，柱温为室温；流动相中A相为：5mM醋酸铵溶液，含0.1％甲酸；B相为乙腈；流速为：0.5mL/min；等度洗脱：流动相A/B的比例为40：60，v/v； MS/MS条件为： ESI正离子扫描模式；参数如下：电喷雾电压，5500V；气帘气，30psi；Gas1，50psi；Gas2，50psi；源温度，550℃，滞留时间，200ms。