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原文传递一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法

专利名称：	一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法
摘要：	本发明涉及抗生素检测技术领域，公开了一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，包括以下步骤：S1、对土壤样品进行干燥、研磨和筛选处理；S2、加入Na2EDTA•2H2O、替代物和提取剂；得到抗生素提取液；S3、将稀释液通过SAX‑HLB串联小柱，得到洗脱液；S4、向洗脱液中加入内标物，得到待测液；S5、利用高效液相色谱‑三重四级杆质谱联用仪对待测液中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的含量进行分析。本发明可以同时检测环境土壤样品中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的残留量，且回收率高，检出限低，稳定性好，操作简便，为环境土壤样品中抗生素的分析提供支持。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南市环境研究院(济南市黄河流域生态保护促进中心)
发明人：	赵传明;孟甜甜;董希良;张利钧;杨丰春;刘玲玲;陈晓梅;付瑶
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-22T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-10T00:00:00+0800
申请号：	CN202311060510.3
公开号：	CN117030897A
代理机构：	山东恒标云知识产权代理有限公司
代理人：	崇鑫
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/04;G01N30/72;G01N30/86;G01N30/88
申请人地址：	250000 山东省济南市高新区新泺大街1299号鑫盛大厦2号楼25层
主权项：	1.一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、对土壤样品进行冷冻干燥处理，研磨后，过16目筛，得到粒径≤1 mm的土壤样品颗粒，并在-20℃条件下密封保存备用； S2、称取1.0g土壤样品颗粒，加入Na2EDTA•2H2O和替代物；加入10ml提取剂；依次经垂直旋转混合仪振荡10min，超声波清洗仪超声清洗15min，高速冷冻离心机在转速5000r/min的条件下离心5min后，收集上清液，重复提取3次，合并3次上清液，得到抗生素提取液；用纯水将抗生素提取液稀释至400mL，再加入甲酸调节pH=2，得到稀释液； S3、将SAX预处理柱和HLB固相萃取柱串联，形成SAX-HLB串联小柱，经过活化后，再利用固相萃取装置使稀释液以5～10mL/min的流速通过SAX-HLB串联小柱，进行上样；上样完成后，弃去SAX预处理柱，用10mL纯水淋洗HLB固相萃取柱，真空抽干10min；用10mL洗脱液洗脱HLB固相萃取柱，收集洗脱液； S4、将洗脱液氮吹至近干，加入内标物，用质量浓度为50%的甲醇水溶液定容至1mL，过0.22μm孔径滤膜，得到待测液； S5、利用高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪对待测液中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的含量进行分析。 2.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，四环素类抗生素包括四环素、土霉素，磺胺类抗生素包括磺胺甲恶唑，喹诺酮类抗生素包括氧氟沙星、环丙沙星，大环内酯类抗生素包括罗红霉素。 3.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S2步骤中，替代物为罗红霉素-D7。 4.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S2步骤中，提取剂为乙腈和磷酸盐缓冲液组成的混合溶液，其体积比为1:1，其中，磷酸盐缓冲液的配制方法如下：将1.93g NaH2PO4•H2O溶于99mL纯水，再加入1mL质量浓度85%的H3PO4，充分混合即可。 5.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S3步骤中，SAX-HLB串联柱小活化的方法如下：将10mL甲醇、10mL纯水以及10mL pH=2的纯水依次自然通过SAX预处理柱和HLB固相萃取柱，其中，pH=2的纯水是用甲酸将纯水的pH调至2。 6.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S3步骤中，洗脱液为质量浓度0.1%的甲酸甲醇溶液。 7.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S4步骤中，内标物为磺胺甲恶唑-13C6和环丙沙星-D8。 8.根据权利要求1所述的一种快速高效同时检测土壤中四环素类、磺胺类、大环内酯类和喹诺酮类抗生素的方法，其特征在于，在所述S5步骤中，高效液相色谱-三重四级杆质谱联用仪中色谱条件如下：使用C18色谱柱，流动相A为0.1%甲酸水溶液，流动相B为乙腈，柱温40℃；流速为0.4mL/min；进样量为15μL；梯度洗脱为：0～1min，10%B；1～6min，10%～95%B；6～8min，95%B；8～10min，95%～30%B；10～10.1min，30%～10%B；10.1～12min，10%B；质谱条件：目标化合物的电离模式采用电喷雾离子源，正离子模式，多反应监测模式；干燥气流量：10.0L/min；雾化气流量：3.0L/min；加热气流量：10.0L/min；接口温度：300℃；DL温度：250℃；加热模块温度：400℃。