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原文传递一种基于SADS-CoV全病毒抗原检测SADS-CoV抗体的间接ELISA试剂盒及方法

专利名称：	一种基于SADS-CoV全病毒抗原检测SADS-CoV抗体的间接ELISA试剂盒及方法
摘要：	本发明公开了一种基于SADS‑CoV全病毒抗原检测SADS‑CoV抗体的间接ELISA试剂盒及方法。提供的试剂盒和方法利用SADS‑CoV全病毒抗原作为包被抗原包被酶标板，以对SADS‑CoV抗体进行间接ELISA检测，可以高准确性检出SADS‑CoV抗体，有助于SADS‑CoV疫苗免疫效果的评价。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	内蒙古;15
申请人：	金宇保灵生物药品有限公司
发明人：	吉格木德;齐志涛;侯丽娜;陈坚;李超;杜宇;辛俊利;刘瑞明;李晓艳;扬青春;俎红丽;王岩;贺瑶;王秉昆;张静;胡莉红;白伟琴;王华
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-09T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202310998364.2
公开号：	CN117110619A
代理机构：	北京尚诚知识产权代理有限公司
代理人：	叶占洋;鲁兵
分类号：	G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N21/78;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N21/78
申请人地址：	010100 内蒙古自治区呼和浩特市经济技术开发区沙尔沁工业园区金宇大街1号
主权项：	1.一种检测SADS-CoV抗体的间接ELISA试剂盒，其包括用SADS-CoV全病毒抗原包被的酶标板。 2.根据权利要求1所述的间接ELISA试剂盒，其中在用SADS-CoV全病毒抗原包被酶标板时，所述SADS-CoV全病毒抗原的浓度为8-12μg/mL。 3.一种检测SADS-CoV抗体的非疾病诊断目的的间接ELISA方法，其包括使用SADS-CoV全病毒抗原作为包被抗原来包被酶标板。 4.根据权利要求3所述的间接ELISA方法，其包括以下步骤： (1)抗原包被：将灭活且纯化的SADS-CoV全病毒抗原作为包被液，包被酶标板的孔，之后洗板； (2)封闭：向步骤(1)已包被的酶标板的孔中加入封闭液，进行封闭，之后洗板； (3)加样：使用样品稀释液将阳性血清、阴性血清和待测血清样品进行稀释后，分别加入步骤(2)已封闭的酶标板的孔中，进行孵育，之后洗板； (4)加酶标二抗：向步骤(3)的酶标板的孔中加入酶标二抗，进行孵育，之后洗板； (5)显色和终止：向步骤(4)的酶标板的孔中加入底物显色液，静置一段时间后，向孔中加入终止液终止反应；和 (6)检测：使用酶标仪检测阳性血清、阴性血清和待测血清样品对应孔的450nm处OD值，若阳性血清对应的OD值≥3倍的阴性血清对应的OD值，则实验成立，若待测血清样品对应的OD值≥3倍的阴性血清对应的OD值，则判定为阳性，反之则为阴性。 5.根据权利要求4所述的间接ELISA方法，步骤(1)中所述包被液的浓度为8-12μg/mL，所述包被的条件为：2～8℃过夜包被。 6.根据权利要求4或5所述的间接ELISA方法，步骤(1)-(5)中所述洗板的操作为：将酶标板放至室温，甩掉孔中的液体，用洗涤液反复洗涤3～5次，在吸水纸上拍干，其中所述洗涤液为PBST。 7.根据权利要求4-6中任一项所述的间接ELISA方法，步骤(2)中所述封闭液为1％鸡蛋白溶液(CSA)，所述封闭的条件为：37±1℃封闭110-130min或者2～8℃过夜封闭。 8.根据权利要求4-7中任一项所述的间接ELISA方法，步骤(3)中按照1：(45-50)稀释倍数将阳性血清、阴性血清和待测血清样品进行稀释，其中所述样品稀释液为pH为7.2～7.4的磷酸盐缓冲液PBS(0.01mol/L)；和/或步骤(3)和步骤(4)中，所述孵育的条件为：37±1℃孵育55-65min。 9.根据权利要求4-8中任一项所述的间接ELISA方法，步骤(4)中所述酶标二抗为HRP-LgG(sogma，1:6000使用)。 10.根据权利要求4-9中任一项所述的间接ELISA方法，步骤(5)中所述显色液为TMB底物显色液，所述终止液为1.5mol/L硫酸。
所属类别：	发明专利