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原文传递基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法及其检测试剂盒

专利名称：	基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法及其检测试剂盒
摘要：	本发明涉及一种基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法及其检测试剂盒以及应用，所述鸭3型腺病毒抗体间接ELISA检测方法，以制备所得的Fiber1蛋白作为包被抗原包被酶标板，将待测血清样品经稀释后加入酶标板孵育，加入酶标二抗孵育后显色，测定反应后血清样品的OD值；本发明以Fiber1蛋白作为包被抗原建立间接ELISA检测方法，可以快速检测鸭3型腺病毒抗体，具有具有良好的特异性和重复性。对临床样品进行检测，结果表明本方法可以作为鸭3型腺病毒抗体检测的一种方法而运用到生产实际中。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建省农业科学院畜牧兽医研究所
发明人：	陈翠腾;万春和;黄瑜;施少华;陈珍;程龙飞;傅光华
专利状态：	有效
申请日期：	2019-05-28T00:00:00+0800
发布日期：	2019-09-06T00:00:00+0800
申请号：	CN201910451898.7
公开号：	CN110208518A
代理机构：	北京中济纬天专利代理有限公司
代理人：	张磊
分类号：	G01N33/531(2006.01);G;G01;G01N;G01N33
申请人地址：	350013 福建省福州市晋安区新店镇埔垱100号
主权项：	1.一种Fiber1蛋白的制备方法：其特征在于：以鸭3型腺病毒的核酸作为模板，利用设计合成的特异性引物进行PCR扩增，回收扩增的PCR产物；将扩增的PCR产物、pET-28a表达载体先用NdeI与XhoI酶切后再连接，构建重组表达质粒；将重组表达质粒转化Rosetta(DE3)感受态细胞，并采用异丙基硫代半乳糖苷诱导表达，将获得的表达产物进行纯化，即得所述Fiber1蛋白；其中，所述特异性引物的序列如下：上游引物F1F:CATATGCTCTGTCCGTTTAGATTCATC；下游引物F1R:CTCGAGTTATACAATCTTCGCTAGGTACGAGA；所述Fiber1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。 2.一种基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：以Fiber1蛋白作为包被抗原包被酶标板，将待测血清样品经稀释后加入酶标板孵育，加入酶标二抗孵育后显色，测定反应后血清样品的OD值。 3.根据权利要求2所述的基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：具体包括以下步骤： (1)包被：以Fiber1蛋白为包被抗原，将包被抗原用包被液稀释后，加入96孔的ELISA塑胶孔板上，每孔100μL，于4℃包被过夜；之后，弃去包被后孔中多余的抗原，每孔加入200μL的洗涤液洗涤4次，洗完后将板拍干； (2)封闭：每孔加入200μL封闭剂，37℃，封闭2h；之后，弃去封闭后孔中多余的封闭剂，用洗涤液洗涤4次，洗完后拍干； (3)加待检血清：每孔加入100μL用样品稀释液稀释过的血清，37℃，孵育1h；之后弃去孵育后孔中多余的血清，用洗涤液洗涤4次，洗完后拍干； (4)加二抗：每孔加入100μL用样品稀释液稀释过的酶标二抗，37℃，孵育1h；之后，弃去孵育后孔中多余的酶标二抗，用洗涤液洗涤4次，洗完后拍干； (5)显色：每孔加入100μL显色剂，37℃避光显色10min； (6)终止：每孔加入100μL终止液；反应终止后置于酶标仪中，在450nm下，读取每个样品的OD值； (7)结果判定：待检血清OD值≥0.353时判定为鸭3型腺病毒抗体阳性，OD值＜0.353判定为阴性。 4.根据权利要求3所述的基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：步骤(1)中，包被抗原用包被液稀释至4μg/mL。 5.根据权利要求3所述的基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：所述包被液为0.05M、pH9.6的碳酸盐缓冲液。 6.根据权利要求3所述的基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：待检血清用样品稀释液按照1:100倍稀释。 7.根据权利要求3所述的基于Fiber1蛋白检测鸭3型腺病毒抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：所述酶标二抗为羊抗鸭IgG酶标二抗；酶标二抗用样品稀释液按1:4000倍稀释。 8.一种鸭3型腺病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒以Fiber1蛋白作为ELISA酶标板的包被抗原。 9.根据权利要求8所述的鸭3型腺病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，其特征在于：它还包括包被液、洗涤液、封闭剂、样品稀释液、酶标二抗、显色剂、终止液、鸭3型腺病毒阳性血清、SPF鸭阴性血清。 10.根据权利要求8所述的鸭3型腺病毒抗体间接ELISA检测试剂盒，在鸭3型腺病毒血清抗体检测中的应用。
所属类别：	发明专利