专利名称: |
基于双抗原对ASFV抗体的间接ELISA检测方法 |
摘要: |
本申请属于动物疫病检测技术领域,具体涉及一种针对非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA检测方法。该方法以CP204L基因编码的p30和B602L基因编码的pB602L蛋白为抗原,包括:包被抗原、封闭、加入待检血清进行孵育、检测等步骤。鉴于p30和pB602L在ASFV结构形成中的重要作用,本申请通过制备纯化的重组ASFV p30和pB602L蛋白,并据此建立了一种可以检测ASFV抗体的双抗原间接ELISA方法,初步实验结果表明,所建立的ELISA检测方法灵敏度和特异性较好,可为ASF检测和判定、以及ASF的早期预防奠定良好的技术基础。 |
专利类型: |
发明专利 |
国家地区组织代码: |
河南;41 |
申请人: |
河南农业大学 |
发明人: |
吴亚楠;张改平;周蕾;宋金星;王梦翔;孙俊如;孙卓雅;田盼盼;张二芹;姬鹏超 |
专利状态: |
有效 |
申请日期: |
2023-08-11T00:00:00+0800 |
发布日期: |
2023-11-10T00:00:00+0800 |
申请号: |
CN202311012142.5 |
公开号: |
CN117031039A |
代理机构: |
郑州锐科知识产权代理事务所(普通合伙) |
代理人: |
王江涛 |
分类号: |
G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58 |
申请人地址: |
450000 河南省郑州市郑东新区龙子湖高校园区15号 |
主权项: |
1.一种基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,该方法包括如下步骤:(一)包被抗原 以CP204L基因编码的p30和B602L基因编码的pB602L蛋白为抗原,将其按比例(4:1)混合并溶解于缓冲液后,包被孔板; (二)封闭 对步骤(一)中包被后孔板,用封闭液进行封闭; (三)加入待检血清进行孵育 加入待检血清后孵育;随后加入酶标二抗孵育; (四)检测 对步骤(三)中孔板清洗干净后,加入显色液避光反应; 最后加入终止液终止反应并测量吸光度;基于待检血清样品的OD450nm值来判定待检血清样品是否为阳性。 2.如权利要求1所述基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,步骤(一)中,摩尔比计,p30:pB602L=4:1; 包被时,将抗原溶解于pH=7.4的PBS缓冲液中制备成浓度为0.6μg/mL的包被液,37℃包被1小时。 3.如权利要求1所述基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,步骤(一)中,所述封闭液为含3~8%脱脂奶粉或牛血清白蛋白(BSA)的TBST缓冲液。 4.如权利要求1所述基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,步骤(三)中,加入待检血清后,37℃孵育0.5~2.5h。 5.如权利要求1所述基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,步骤(三)中,酶标二抗的稀释度为1:2000~10000。 6.如权利要求1所述基于双抗原间接ELISA检测ASFV抗体的方法,其特征在于,步骤(四)中,OD450nm临界值为0.403,如果待检血清样品的OD450nm值≥临界值,则判定待检血清标本为阳性。 |
所属类别: |
发明专利 |