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原文传递一种利用间接ELISA法检测破伤风抗体效价的检测方法

专利名称：	一种利用间接ELISA法检测破伤风抗体效价的检测方法
摘要：	本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种利用间接ELISA法检测破伤风抗体效价的检测方法。该检测方法的试剂盒包括抗原包被板、样品稀释液A、样品稀释液B、酶标记物鼠抗人IgG、底物液、洗涤液、终止液。本发明采用间接法检测破伤风抗体，准确性高，稳定性好，能够清澈判定破伤风抗体的效价，为规范疫苗效力检测提供了依据。
专利类型：	发明专利
申请人：	山东帝俊生物技术有限公司
发明人：	白毅;肖晓;刘文娟
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T02:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T21:00:00+0805
申请号：	CN202010001033.3
公开号：	CN111044721A
代理机构：	济南泉城专利商标事务所
代理人：	陈娟
分类号：	G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
申请人地址：	271001 山东省泰安市泰山区明堂路中段中正集团北楼
主权项：	1.一种利用间接ELISA法检测破伤风抗体效价的检测方法，其特征在于，所述检测的试剂盒包括：抗原包被板、样品稀释液A、样品稀释液B、酶标记物鼠抗人IgG、底物液、洗涤液、终止液。 2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述抗原包被板为破伤风类毒素包被微孔板，具体处理过程为：（1）：添加100mM DTT于破伤风类毒素中，25℃避光处理1小时后添加固体尿素颗粒，至尿素浓度为4M，取处理后的破伤风类毒素于PBS缓冲液中透析4h；（2）将处理后的破伤风类毒素经离子交换柱及疏水层析柱纯化即可。 3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述样品稀释液A含有以下成分：乙二胺四乙酸二钠 0.5~1.2g/L、季铵淀粉醚0.2~0.5g/L、甘油0.5~1.0g/L、海藻糖醇0.2g/L、氯化钠8.5~10.5g/L、硼酸盐缓冲液 0.8~1.2 g/L、叠氮钠0.3~0.5g/L；所述样品稀释液B为浓度为7.5g/L的吐温-80及生理盐水。 4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述底物液含有以下成分： 4-羧乙基哌嗪乙磺酸30-35g/L、柠檬酸8-10g/L、磷酸氢二钠8.5-11.0g/L、TMB3-5g/L。 5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述洗涤液含有以下成分：氯化钠15g/L、碘化钾3g/L、磷酸氢钠0.255g/L，磷酸氢钾0.45g/L。 6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述终止液为H2SO40.8mol/L。 7.根据权利要求1-6任一项所述的检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1）样品预稀释：在血清稀释板上，每孔加入样品稀释液A 100ul，再加入待测样品10ul，轻轻震荡混匀待用； (2）加样：在抗原包被板上，设标准品孔，每孔加入相应标准品 100ul；留空白对照1孔；其余样品孔，每孔加入样品稀释液B 100ul，再加入预稀释过的样品10ul，轻轻震荡混匀； (3）温育：加好样品的抗原包被板，用封口胶封盖后置37℃温育30分钟； (4）洗板：温育后，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡30秒，洗完后拍干； (5）加酶：每孔加入酶标记物100ul，轻轻震荡混匀； (6）温育：加好酶标记物的抗原包被板，用封口胶封盖后置37℃温育20分钟； (7）洗板：温育后，用洗涤液洗涤5次，每次浸泡30秒，洗完后拍干； (8）显色：每孔先加入底物液100 ul，轻轻震荡混匀，用封口胶封盖后置37℃避光显色10分钟； (9）测量：显色完毕后，每孔加入终止液50 ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果；以空白对照孔调零，置酶标仪450nm/630nm（620nm）波长处测定各孔吸光值。 8. 根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述标准品的浓度为10、5、2.5、1IU/ml。
所属类别：	发明专利