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基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法
| 专利名称： | 基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法 |
| 摘要： | 本发明提供了基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，包括以下内容：制备靶细胞、制备效应细胞和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定。本发明通过反应靶细胞被杀伤的情况反应抗体结合靶细胞的情况，具有更广泛的应用性，可以通过修改靶细胞检测不同种类的抗体的效价。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 上海轩锋生物科技有限公司 |
| 发明人： | 向洋;王金涛 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-07-25T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-10-11T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910674187.6 |
| 公开号： | CN110320352A |
| 分类号： | G01N33/50(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 200120 上海市浦东新区康桥东路1088号H309 |
| 主权项： | 1.基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于，包括以下内容： 步骤一、制备靶细胞，所述制备靶细胞具体内容为：在BSL-3实验设施内进行实验，实验开始前48h使用A/California/04/2009(H1N1)型流感病毒感染raji细胞，MOI为2，细胞会合度为80-95％；感染后48h收集靶细胞，通过其与火鸡红细胞产生血液凝集以及与多克隆抗体结合的能力来评估其感染细胞的能力；能力评估合格后，计数2*106个靶细胞，并用PBS清洗两次； 步骤二、制备效应细胞，所述制备效应细胞具体内容为：从志愿者体内采集全血，然后使用密度梯度离心法获得单个核细胞(PBMC)； 步骤三、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定，所述抗体依赖性细胞介导的细胞毒性的抗体效价测定具体内容为：将步骤一中获取的靶细胞接种到培养板中，每孔50ul 1640培养基、5.0×104个标记的靶细胞；向每个孔中加入50ul抗体；在37℃的CO2培养箱中孵育15分钟；将步骤二中获取的未标记的正常PBMC效应细胞悬浮为浓度2.5x107cells/ml，每个孔中加入100ul细胞悬液；在37℃的CO2培养箱中孵育2小时；再加入1ul荧光染料7-氨基-放线菌素-D；在4℃下避光孵育20分钟；使用流式细胞仪上机分析，共获取5000个细胞；分析靶细胞中死亡细胞的百分比即可反应出该抗体的效价。 2.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述PBS即磷酸盐缓冲液，能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力，是生物学中经常使用的缓冲盐溶液，用于分子克隆及细胞培养等，pH为7.2-7.4，与人体血液等渗，主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以及氯化钾。 3.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述MOI为感染复数，即感染时病毒与细胞数量的比值。 4.根据权利要求1所述的基于抗体依赖的细胞介导细胞毒性的抗体效价检测方法，其特征在于：所述步骤三中的培养板为96孔圆底培养板。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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