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利用生物效价检测与HPLC快速检测多抗霉素B的方法
| 专利名称： | 利用生物效价检测与HPLC快速检测多抗霉素B的方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种利用烟草赤星病菌作为生物效价检测的指示菌，结合HPLC化学检测方法，快速定量检测样品中多抗霉素B的含量。检测方法在于利用自制木盘作为检测工具，检测样品的数量为传统方法的9倍，每个检测玻璃木盘中对应相应的标准曲线，可快速准确的筛选生物效价高的样品，将筛选的高含量样品采用HPLC检测化学含量，降低生产成本，降低劳动强度，可用于对多抗霉素B菌种的高通量筛选和生产过程中的监控。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 山东;37 |
| 申请人： | 乳山韩威生物科技有限公司 |
| 发明人： | 徐晓庆;杨孟森;宫照普 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2017-11-09T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-05-17T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201711096395.X |
| 公开号： | CN109765364A |
| 分类号： | G01N33/569(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 264500 山东省威海市乳山市青山路306号 |
| 主权项： | 1.确定一种利用烟草赤星病菌快速定量分析多抗霉素B的生物效价的方法其特征在于，在如下步骤 （1）确定此方法专用的自制木盘，盘为30*20*4底面镶嵌玻璃作底用34*24的玻璃做盖子； （2）确定杯碟法测定多抗霉素B的生物检测条件，下层培养基加量为150mL，上层培养基加量为125mL指示菌加量为8-12mL，牛津杯滴加样品量为200µL； （3）标准曲线的建立：取多抗霉素B样品，用缓冲液稀释到，25IU/mL、50 IU/mL 、100IU/mL，测不同浓度抑菌圈直径大小，并用抑菌圈直径为横坐标，多抗霉素B浓度的对数值为纵坐标，绘制标准曲线； （4）赤星病菌指示菌的制备； （5）HPLC检测方法采用C18 柱进行检测，用甲醇：水=10：90作为流动相，完成检测实验。 2.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤（1）中，采用自制玻璃木盘作为检测工具，规格为长30cm*宽20cm*高4cm，底面积为600cm2。 3.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤（2）中上层培养基为2%琼脂培养基，下层培养基为2%PDA培养基，关键在于上层培养基中加入链霉素，抑制杂菌的生长，上下层培养基的加量，能够达到最佳的实验效果。 4.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤（3）中所绘制的标准曲线是在相同条件下绘制的，误差值小。 5.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤（4）中指示菌为烟草赤星病菌，进行菌丝体的扩培和破碎。 6.根据权利要求1所述方法，其特征在于步骤（2）中HPLC检测方法是利用C18作为分析柱，甲醇作为有机流动相。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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