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检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法
| 专利名称： | 检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法 |
| 摘要： | 本发明涉及检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，包括以下步骤：(1)白果蛋白提取：取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH 8.5，0.15mol/LTris-HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40％-80％饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；(2)鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备(3)双抗体夹心ELISA方法检测白果过敏蛋白。本发明能筛选白果及其制品中过敏蛋白。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京林业大学 |
| 发明人： | 吴彩娥;曹福亮;范龚健;李婷婷;李莹莹 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2010-07-28T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201010238892.0 |
| 公开号： | CN101936999A |
| 代理机构： | 南京天翼专利代理有限责任公司 32112 |
| 代理人： | 周静 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01)I |
| 申请人地址： | 210037 江苏省南京市龙蟠路159号 |
| 主权项： | 一种检测白果过敏蛋白的双抗体夹心ELISA方法，其特征在于包括以下步骤：(1)白果蛋白提取取白果1kg，经冻干处理后研磨，加入5～7倍体积石油醚脱脂，用pH 8.5，0.15mol/LTris HCl溶液提取白果蛋白，经冷冻离心后得到蛋白上清液，经过40％ 80％饱和度的硫酸铵沉淀，再次冷冻离心，得到沉淀用0.01mol/L、pH7.4磷酸盐缓冲液溶解，并用所述磷酸盐缓冲液进行透析，透析完全后，冷冻干燥，得到白果蛋白提取物；所述白果蛋白提取物用上述磷酸盐缓冲液溶解，得到白果蛋白提取物溶液；(2)鼠源过敏原特异性抗体IgE的制备小鼠经100mg/ml白果蛋白提取物溶液经口灌胃致敏、200mg/ml白果蛋白提取物溶液腹腔注射激发，激发后1h小鼠眼眶取血，分离小鼠抗血清，从小鼠抗血清中分离得到鼠源过敏原特异性抗体IgE；(3)白果过敏蛋白的检测将鼠源过敏原特异性抗体IgE固定在载体上；加入待测样本，使其中可能存在的过敏原与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合，形成结合物；再加入酶标记二抗，使其与鼠源过敏原特异性抗体IgE结合成为复合物；最后显色剂显色，根据颜色变化判定样本中过敏蛋白的存在与否及过敏蛋白浓度。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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