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原文传递一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒及其检测方法

专利名称：	一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒及其检测方法
摘要：	本发明涉及一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒及其检测方法。利用猪丹毒SpaA蛋白免疫小鼠，筛选杂交瘤细胞，制备的抗体可以特异性识别SpaA蛋白，基于该单克隆抗体经过一系列反应条件的优化建立了夹心ELISA，可用于猪丹毒SpaA蛋白的定量，检测最低浓度可达到0.1ng/ml，灵敏度高，相关系数R2为0.993，定量准确性好，可应用于猪丹毒SpaA蛋白的定量检测，该方法的建立克服了目前传统定量方法中存在的无法区分杂蛋白与目的蛋白的情况，从而保证定量数据的精确性，提高疫苗工艺的稳定性与严谨性。
专利类型：	发明专利
申请人：	浙江鼎持生物制品有限公司;北京鼎持生物技术有限公司
发明人：	周佳彬;刘喜凤;张菁怡;王浩宇;仲鑫;郑杰;马宁宁
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-29T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202310790745.1
公开号：	CN116990508A
代理机构：	济南盈泰恒专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	左海明
分类号：	G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/577;G01N33/58
申请人地址：	311800 浙江省绍兴市诸暨市陶朱街道环城北路368号;
主权项：	1.一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括包被有抗猪丹毒SpaA蛋白单克隆抗体的酶标板、稀释液、封闭液、酶标抗体、浓缩洗涤液、显色液、终止液、标准品、阳性对照、阴性对照，所述包被有抗猪丹毒SpaA蛋白单克隆抗体的酶标板使用的是单抗16H7，所述单抗16H7由小鼠杂交瘤细胞(Ery)-16H7株获得，所述小鼠杂交瘤细胞(Ery)-16H7株于2023年5月17日送交至中国科学院微生物研所菌种保藏中心保藏，保藏号为45611。 2.根据权利要求1所述的一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒，其特征在于：所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的抗猪丹毒SpaA单克隆抗体，所述抗猪丹毒SpaA单克隆抗体为单抗24G12，所述单抗24G12由小鼠杂交瘤细胞(Ery)-24G12株获得，所述小鼠杂交瘤细胞(Ery)-24G12株于2023年5月17日送交至中国科学院微生物研所菌种保藏中心保藏，保藏号为45612。 3.根据权利要求1所述的一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒，其特征在于：所述稀释液为0.05M碳酸盐缓冲液，PH值为9.6，含有1.59g的Na2CO3、2.93g的NaHCO3。 4.根据权利要求1所述的一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA试剂盒，其特征在于：所述封闭液为含5％脱脂乳的PBS溶液。 5.一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA检测方法，其特征在于，包括以下步骤： (1)用包被液稀释纯化后的单抗16H7，按照100μl/孔包被酶标板，37℃包被2h或者4℃作用过夜； (2)甩去板中的液体，用洗涤液洗板5次，每次5min，最后一次拍干，加入封闭液，100μl/孔，置37℃孵育1.5h； (3)用洗涤液洗板5次，加入稀释后的待检抗原样品及对照样品，100μl/孔，置37℃孵育，同时设置用脱脂乳代替的不加抗原对照； (4)用洗涤液洗板5次，加入稀释的酶标抗体24G12-HRP，100μl/孔，置37℃孵育1h； (5)用洗涤液洗板5次，加入TMB显色液，50μl/孔，室温显色15min； (6)加终止液，50μl/孔，混匀后10min内测定OD450nm值。 6.根据权利要求5所述的一种猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心定量ELISA检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中包被液按照1:1000稀释单抗16H7，所述步骤(4)中酶标抗体按照1:2000稀释。 7.一种如权利要求1所述的猪丹毒SpaA蛋白双抗体夹心ELISA试剂盒在猪丹毒SpaA抗原的抗原检测中的应用。
所属类别：	发明专利