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原文传递一种基于Ag2O纳米粒子对多孔C3N5纳米花的猝灭效应的电化学发光传感器的制备方法

专利名称：	一种基于Ag2O纳米粒子对多孔C3N5纳米花的猝灭效应的电化学发光传感器的制备方法
摘要：	本发明涉及一种基于Ag2O纳米粒子对多孔C3N5纳米花的猝灭效应的电化学发光传感器的制备方法，属于新型传感器构建技术领域。基于抗原抗体之间良好的特异性，该传感器以多孔C3N5纳米花作为基底发光材料，氨基化的Ag2O纳米粒子为猝灭剂，通过层层组装构建了电化学发光传感器。本发明构建的电化学发光传感器具有较低的激发电位，较宽的检测范围，较低的检测限，较高的灵敏度，对癌胚抗原的检测具有重要的意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	胡丽华;于浩;黄先杰;李凤迪;王韵;廖贤鹏;魏琴
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-28T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202311086329.X
公开号：	CN117074498A
分类号：	G01N27/327;G01N21/76;G01N33/574;G01N33/532;G;G01;G01N;G01N27;G01N21;G01N33;G01N27/327;G01N21/76;G01N33/574;G01N33/532
申请人地址：	250022 山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于Ag2O纳米粒子对多孔C3N5纳米花的猝灭效应用于检测癌胚抗原的电化学发光传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）用 Al2O3抛光粉打磨直径为4 mm的玻碳电极，超纯水清洗干净，将6 µL、0.5~3.2 mgmL-1 的多孔C3N5纳米花结合癌胚抗原识别抗体的一抗标记物C3N5-Ab1溶液滴加到电极表面，室温下晾干成膜；（2）滴加3 µL、质量分数为0.1%的BSA溶液到电极表面，用超纯水洗净，室温下晾干；（3）滴加6 µL、0.0005~100 ng mL-1的一系列不同浓度的癌胚抗原的抗原到电极表面，孵化2 h，超纯水冲洗，室温下晾干；（4）滴加6 µL的氨基化的Ag2O纳米粒子结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Ag2O-NH2-Ab2溶液，超纯水冲洗，室温下晾干，制得一种电化学发光传感器；所述的氨基化的Ag2O纳米粒子结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Ag2O-NH2-Ab2溶液的制备步骤如下：（1）Ag2O纳米粒子的制备将0.60 g AgNO3溶解于50 mL去离子水中，并在室温下保持搅拌30 min，同时，配制50mL浓度为0.2 mol L-1的NaOH，将0.2 mol L-1的NaOH溶液缓慢滴加到已经溶解的AgNO3溶液中，并将该溶液的 pH控制在14左右；使用去离子水对所得产物进行离心洗涤4次，并将洗涤后的产物放置在50 °C烘箱中干燥12 h，对所得样品进行研磨，得到的样品即Ag2O纳米粒子；（2）氨基化的Ag2O纳米粒子的制备取 100 mg的Ag2O纳米粒子粉末，将其直接置于30 mL无水乙醇中搅拌，待Ag2O纳米粒子粉末分散开后加入0.2 mL的3-氨丙基三乙氧基硅烷，将油浴锅温度调整到70 °C保持冷凝回流1.5 h；然后对所得产物进行离心洗涤，先用去离子水洗涤3次再使用无水乙醇洗涤3次，将洗涤后的产物放置到50 °C的烘箱中过夜烘干，然后对所得样品进行研磨，得到氨基化的Ag2O纳米粒子即Ag2O-NH2；（3）氨基化的Ag2O纳米粒子结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Ag2O-NH2-Ab2溶液的制备称取400 mmol L-1的（1-（3-二甲氨基丙基））-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与100 mmol L-1的N-羟基琥珀酰亚胺溶于1 mL pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，待两者溶解完全后向其中加入100 μL 10 μg mL-1癌胚抗原识别抗体Ab2 并在4 °C下保持2 h，随后向其中加入2 mg的氨基化的Ag2O纳米粒子粉末，将混合物进行密封并将其保持在4 °C下持续震荡孵化过夜，随后加入100 μL 1% BSA以阻断非特异性位点并离心以除去未结合的抗体，将得到的固体分散在1 mL pH 7.4的PBS中，即得氨基化的Ag2O纳米粒子结合癌胚抗原识别抗体的二抗标记物Ag2O-NH2-Ab2溶液。 2.如权利要求1所述的一种基于Ag2O纳米粒子对多孔C3N5纳米花的猝灭效应用于检测癌胚抗原的电化学发光传感器的制备方法，其特征在于，所述的多孔C3N5纳米花结合癌胚抗原识别抗体的一抗标记物C3N5-Ab1溶液的制备步骤如下：（1）多孔C3N5纳米花的制备称取2 g的 3-氨基-1，2，4-三唑研磨5 min，将研磨后的粉末放入带盖的氧化铝坩埚中，放入马弗炉中进行程序升温2 °C min-1升到500 °C，保持240 min然后自然冷却至室温，对所得样品进行研磨，然后将研磨的样品再次置于瓷舟中，使用锡箔纸进行密封包裹，并通入氮气，在氮气气氛下，以2 °C min-1的升温速度升到550 °C保持240 min，待其自然冷却至室温，对所得样品进行研磨，得到的样品即为多孔C3N5纳米花；（2）多孔C3N5纳米花结合癌胚抗原识别抗体的一抗标记物C3N5-Ab1溶液的制备称取400 mmol L-1的（1-（3-二甲氨基丙基））-3-乙基碳二亚胺盐酸盐与100 mmol L-1的N-羟基琥珀酰亚胺溶于1 mL pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中，待两者溶解完全后向其中加入100 μL 10 μg mL-1癌胚抗原识别抗体Ab1 并在4 °C下保持2 h，随后向其中加入2 mg的多孔C3N5纳米花粉末，将混合物进行密封并将其保持在4 °C下持续震荡孵化过夜，随后离心以除去未结合的抗体，将得到的固体分散在1 mL pH 7.4的PBS中，即得多孔C3N5纳米花结合癌胚抗原识别抗体的一抗标记物C3N5-Ab1。 3.一种非疾病诊断和治疗目的的电化学发光传感器在癌胚抗原检测中的应用，其特征在于，所述电化学发光传感器采用如权利要求1或2所述的制备方法制得，检测步骤如下：（1）将Ag/AgCl 作为参比电极，铂丝作为对电极，所制备的电化学发光传感器作为工作电极正确连接在化学发光检测仪的暗盒中，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起，光电倍增管的高压设置为650 V，在含有20-100 mmol L-1过硫酸钾的pH=7.4的PBS缓冲溶液中进行测试；（2）用电化学发光法对癌胚抗原标准溶液进行检测，其电压测试范围为-1.3-0 V；（3）观察癌胚抗原加入前后传感器的电化学发光强度，然后记录电化学发光强度值与癌胚抗原浓度的线性关系，绘制工作曲线。
所属类别：	发明专利