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原文传递一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用

专利名称：	一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用
摘要：	本发明涉及一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用，属于电化学发光检测技术领域。开发并首次验证了四苯乙烯纳米簇与二硫化锡/二氧化锡复合纳米晶能量转移对在低电位下可达到的高效电化学发光猝灭的行为，一方面解决了发光材料在电极上的固定问题，另一方面解决了有效调节发光强度的问题。根据对不同浓度的原降钙素响应的电化学发光信号强度不同，实现对原降钙素的检测。通过采用F检验、T检验展示本方法的准确度和精密度，测试结果均小于理论值，说明该方法准确可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南大学
发明人：	魏琴;薛经纬;鞠熀先;赵磊;贾越;王欢;吴丹;范大伟
专利状态：	有效
申请日期：	2019-08-29T00:00:00+0800
发布日期：	2019-11-12T00:00:00+0800
申请号：	CN201910805118.4
公开号：	CN110441297A
代理机构：	济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业)
代理人：	赵凤
分类号：	G01N21/76(2006.01);G;G01;G01N;G01N21
申请人地址：	250022山东省济南市市中区南辛庄西路336号
主权项：	1.一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤：（1）依次用1.0、0.3、0.05 μm的氧化铝粉末对玻碳电极进行抛光，在超纯水和乙醇中超声清洗，氮气吹干；（2）在处理好的电极表面滴加6 μL、浓度为0.5~5 mg/mL的四苯乙烯纳米簇分散液作为传感基底材料，4 °C下晾干成膜；（3）加入3~8 mM巯基乙酸在4 °C下浸泡5 h后转入EDC/NHS混合体系中浸泡30 min来活化羧基；（4）继续在4 °C条件下浸泡浓度为5~15 μg/mL的原降钙素抗体1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液洗净电极表面，4°C下晾干；（5）在质量浓度为1~3%的牛血清白蛋白中浸泡来封闭非特异性活性位点，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，常温下晾干；（6）滴加6 μL、浓度为0.0001~50 ng/mL的原降钙素抗原，在室温下孵化1 h后，用pH7.4的磷酸盐缓冲溶液冲洗电极表面，室温下晾干；（7）继续滴加6 μL、浓度为2~4 mg/mL的二硫化锡/二氧化锡复合纳米晶捕获抗体孵化液于电极表面，室温下孵化1 h，用pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液缓慢冲洗电极表面，室温下晾干；（8）传感器构建完毕，进行电致化学发光测试。 2.如权利要求1所述的一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用，其特征在于，所述基底材料四苯乙烯纳米簇的制备，包括以下步骤：（1）四苯乙烯纳米簇的制备采用脱溶法，制备了四苯乙烯纳米晶；将0.5 mg 四苯乙烯粉末溶解于0.5 mL四氢呋喃中，得到均匀无色的四苯乙烯溶液；随后，用5 mL去离子水在室温下超声分散10 mg 牛血清白蛋白；然后将0.5 mL 四苯乙烯在超声下缓慢注入牛血清白蛋白溶液中，室温搅拌2 h；最后用水和无水乙醇洗涤后放入真空干燥箱中干燥得到四苯乙烯纳米晶粉末；如权利要求1所述的一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用，其特征在于，所述二硫化锡/二氧化锡纳米晶标记的原降钙素检测抗体溶液的制备，包括以下步骤：（1）二硫化锡/二氧化锡纳米晶的制备采用简单的一步水热法；将2.0~8.0 mmol 五水合四氯化锡通过超声处理加入15~50 mL超纯水中5~20 min，再将2.0~12.0 mmol硫代乙酰胺加入上述混合体系中搅拌10~40 min，得到的混合溶液转移到50 mL聚四氟乙烯内衬的高压釜中加热至100~250℃并保持6 h，通过蒸馏水及无水乙醇的轮流洗涤并干燥获得产物；（2）二硫化锡/二氧化锡纳米晶捕获抗体孵化液的制备将（1）步骤中获得的产物，分散到5~20 mL乙醇中形成稳定分散液，加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，在30~150℃下回流0.5~3.5 h，然后放入35℃真空干燥箱中干燥6~18 h，得到氨基化的二硫化锡/二氧化锡纳米晶，将其分散在1 mL 蒸馏水中；接着，将1mL 10 ng/mL HWRGWVC多肽链溶液加入上述溶液中，在4 °C振荡1 h； 12000 转/分离心后，将沉淀物分散到1 mL pH7.4的磷酸盐缓冲溶液中；随后100~300 μL 0.1% 牛血清白蛋白的加入溶液中用来封闭特异性活性位点；离心分离和洗涤后；随后加入100~300 μL 10 mg/mL的原降钙素抗原的捕获抗体，在4°C下孵化6~12 h；随后离心去除上清液，重新分散到在1 mL pH 7.4的磷酸盐缓冲溶液中，得到二硫化锡/二氧化锡纳米晶捕获抗体孵化液，储存在4 °C下备用。 3.如权利要求1所述的一种基于四苯乙烯纳米簇的电化学发光猝灭型传感器制备方法及应用，用于样品的检测，其特征在于，步骤如下：（1）使用电化学工作站的三电极体系进行测试，Ag/AgCl电极作为参比电极，铂丝电极为对电极，所制备的电化学发光传感器为工作电极，将电化学工作站和化学发光检测仪连接在一起将光电倍增管的高压设置为700 V，循环伏安扫描电位范围为-1.15~0 V，扫描速率为0.12 V/s；（2）将处理完毕的电致化学发光传感器浸入在10 mL、pH 6.5~8.6的含浓度为0.5~1.5mol/L过硫酸钾的磷酸盐缓冲溶液中，接通电化学发光系统，孵化不同浓度的原降钙素时传感器进行测试，根据产生的不同的电化学发光信号强度，绘制工作曲线；（3）将待测样品溶液代替待测物抗原进行检测。
所属类别：	发明专利