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原文传递血小板聚集功能检测试剂、其制备方法及检测方法

专利名称：	血小板聚集功能检测试剂、其制备方法及检测方法
摘要：	本发明公开了一种血小板聚集功能检测试剂、其制备方法及检测方法，该检测试剂为以花生四烯酸为芯材、以环糊精和阿拉伯树胶为壁材，并添加乳化剂、抗氧化剂、冻干保护剂、防腐剂、缓冲盐和水作为辅助成分制备得到的微囊型花生四烯酸检测试剂，该检测试剂包括按质量百分比计的以下原料组分。本发明提供的制备方法不仅可使花生四烯酸冻干前后活性不发生变化，而且还能提高花生四烯酸的稳定性。本发明提供的冷冻干燥法制备微囊化花生四烯酸的工艺，可不改变其激活血小板活性的同时，减少因外界环境变化而引起的花生四烯酸理化性质的改变，提高储藏稳定性，更进一步提高花生四烯酸试剂的灵敏性和开瓶稳定性。
专利类型：	发明专利
申请人：	中国科学院苏州生物医学工程技术研究所;中科精瓒(武汉)医疗技术有限公司
发明人：	赵颖;梁伟国;黄梦璐;孙海旋;李富阳;陈明;李俊坡;袁亮;周虎军;许庆红
专利状态：	有效
申请日期：	2023-06-26T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-17T00:00:00+0800
申请号：	CN202310758541.X
公开号：	CN117074704A
代理机构：	北京远大卓悦知识产权代理有限公司
代理人：	李淑亚
分类号：	G01N33/86;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/86
申请人地址：	215163 江苏省苏州市高新区科技城科灵路88号;
主权项：	1.一种血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，该检测试剂为以花生四烯酸为芯材、以环糊精和阿拉伯树胶为壁材，并添加乳化剂、抗氧化剂、冻干保护剂、防腐剂、缓冲盐和水作为辅助成分制备得到的微囊型花生四烯酸检测试剂，该检测试剂包括按质量百分比计的以下原料组分：花生四烯酸：0.1～1％；β环糊精：0.1-1％；阿拉伯树胶：0.1-1％；乳化剂：0.1-2％；抗氧化剂：0.01-0.1％；冻干保护剂：0.1-10％；防腐剂：0.01-0.1％；其余部分为缓冲盐和水。 2.根据权利要求1所述的血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，所述乳化剂为酪蛋白、乳清蛋白、单甘油脂肪酸甘油酯、明胶中的任意一种或多种的混合物。 3.根据权利要求2所述的血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，所述抗氧化剂为VC、VE、硫代硫酸钠、茶多酚、二硫苏糖醇的一种或多种的混合物。 4.根据权利要求3所述的血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，所述冻干保护剂为PEG8000、Proneix、BSA、乳糖、海藻糖、蔗糖任一种或多种的混合物。 5.根据权利要求4所述的血小板聚集功能检测试剂，其特征在于，所述环糊精为β-环糊精，所述防腐剂为Proclin，缓冲盐为磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液的一种，且缓冲盐的浓度为5-50mM；所述乳化剂为酪蛋白，所述抗氧化剂为硫代硫酸钠和二硫苏糖醇的混合物，所述冻干保护剂为Proneix和乳糖的混合物，所述缓冲盐为磷酸盐缓冲液。 6.一种如权利要求1-5中任意一项所述的血小板聚集功能检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取环糊精、阿拉伯树胶，用缓冲盐溶液充分溶解后冷却至室温，依次加入乳化剂、抗氧化剂、冻干保护剂及防腐剂，搅拌至完全溶解； S2、预乳液制备：于搅拌状态下向步骤S1所得产物中加入花生四烯酸，得到预乳液； S3、乳化：将步骤S1得到的预乳液用均质机充分乳化后分装，预冻； S4、冻干，冻干结束后，真空压塞，得到所述血小板聚集功能检测试剂。 7.根据权利要求6所述的血小板聚集功能检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取环糊精、阿拉伯树胶，用60-70℃的缓冲盐溶液充分溶解后冷却至室温，依次加入乳化剂、抗氧化剂、冻干保护剂及防腐剂，磁力搅拌至完全溶解； S2、预乳液制备：在低于16℃的环境中、于磁力搅拌状态下向步骤S1所得产物中加入花生四烯酸，得到预乳液； S3、乳化：在低于16℃的环境中，将步骤S1得到的预乳液用均质机在8000-16000r/min下乳化5-30min，然后分装，置于-80℃下预冻2-6h； S4、真空度应控制在0.01-1.0mbar下冻干10-24h，冻干结束后，真空压塞，得到所述血小板聚集功能检测试剂。 8.根据权利要求7所述的血小板聚集功能检测试剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、取0.2wt％的环糊精、0.5％的阿拉伯树胶加入20mM的磷酸盐缓冲液中，70℃下充分溶解后冷却至室温，依次加入1wt％的酪蛋白、0.08wt％的二硫苏糖醇、0.05wt％的硫代硫酸钠、2wt％的Proneix、4wt％的乳糖、0.04wt％的Proclin，磁力搅拌至完全溶解； S2、预乳液制备：在低于16℃环境中、于磁力搅拌状态下向步骤S1所得产物中加入0.5wt％的花生四烯酸，得到预乳液； S3、乳化：在低于16℃环境中，将步骤S1得到的预乳液用均质机在10000r/min下乳化12min，然后分装，置于-80℃下预冻4h； S4、真空度应控制在0.2mbar下冻干18h，冻干结束后，真空压塞，得到所述血小板聚集功能检测试剂。 9.一种血小板聚集功能检测方法，其特征在于，包括以下步骤： 1)用规定体积去离子水复溶如权利要求1-5中任意一项所述的血小板聚集功能检测试剂，静置10-30min，得到检测试剂溶液； 2)向测试杯中分别加入纤维蛋白激活剂、步骤1)得到的检测试剂溶液和含阿司匹林的样本，进行血栓弹力图测试，所得血栓弹力图MA值即为花生四烯酸杯血块强度。 10.根据权利要求9所述的血小板聚集功能检测方法，其特征在于，其中，所述的含阿司匹林的样本为服用阿司匹林药物后的人员的血液样本，或者为未服用阿司匹林药物的人员的血液与0.001-0.1mg/mL的阿司匹林混合得到的样本。
所属类别：	发明专利