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原文传递一种基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的方法

专利名称：	一种基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的方法
摘要：	本发明涉及检测技术领域，具体公开了一种基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的方法。该方法使用的试剂盒包括HPV中和抗体标准品、HPV L1(E7)VLP抗原；HPV L1(E7)VLP抗原通过将HPV病毒的L1基因删除N末端序列同时在VLP内部包裹突变型HPV E7基因，并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得；突变型HPV E7基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明基于竞争法开发一种专门用于HPV疫苗接种后中和抗体血清的定量检测方法，可检测同一样本中不同型别HPV中和抗体的水平，且具备操作简单、高通量、检测周期短，准确性高、灵敏度高以及特异性好的优点。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广东省一鼎生物技术有限公司
发明人：	陆家海;廖聪慧;叶宇翔;肖人苗;郭城
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-21T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-24T00:00:00+0800
申请号：	CN202311057183.6
公开号：	CN117110606A
代理机构：	广州嘉权专利商标事务所有限公司
代理人：	廖奇丽
分类号：	G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58
申请人地址：	528199 广东省佛山市三水区云东海街道南丰大道63号四座4层410
主权项：	1.一种基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒，其特征在于，包括HPV中和抗体标准品、HPV L1(E7)VLP抗原；所述HPV L1(E7)VLP抗原通过将HPV病毒的L1基因删除N末端序列同时在VLP内部包裹突变型HPV E7基因，并进行蛋白质表达、蛋白质纯化和颗粒组装制得；所述突变型HPV E7基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述HPV病毒的L1基因为HPV6 L1基因、HPV11 L1基因、HPV16 L1基因、HPV18 L1基因、HPV31 L1基因、HPV33 L1基因、HPV35 L1基因、HPV45 L1基因、HPV52 L1基因、HPV58L1基因、HPV59 L1基因中的至少一种。 3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述HPV中和抗体标准品含有标签分子；所述标签分子包括辣根过氧化物酶、吖啶酯中任意一种。 4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述HPV病毒的L1基因删除N末端序列以如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的上下游引物进行PCR扩增。 5.权利要求1所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤中任意一种： (1)将待测样品稀释后加入包被有HPV L1(E7)VLP抗原的酶标板中孵育；弃混合液体，洗涤；向酶标板中加入HPV中和抗体标准品孵育，弃混合液体，洗涤；加入显色液孵育，孵育完毕后加入终止液终止反应，并进行结果判断； (2)将待测样品与HPV L1(E7)VLP抗原、HPV中和抗体标准品混合，外加磁场制得沉淀复合物，弃上清液，沉淀复合物清洗后使用化学发光免疫分析法测量。 6.根据权利要求5所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述HPV中和抗体标准品先与辣根过氧化物酶混合，透析，形成辣根过氧化物酶标记的HPV中和抗体标准品。 7.根据权利要求5所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述包被的浓度为1.5-2.5μg/mL。 8.根据权利要求5所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述HPV L1(E7)VLP抗原需要先与活化的磁微粒反应制得HPV L1(E7)VLP抗原-磁微粒偶联物。 9.根据权利要求5所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述HPV中和抗体标准品先与吖啶酯混合，偶联，透析，制得HPV中和抗体标准品-吖啶酯发光试剂。 10.权利要求5至9中任一项所述的基于竞争法检测HPV不同型别中和抗体的试剂盒的检测方法在疫苗评价体系中的应用。
所属类别：	发明专利