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原文传递一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条及其在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用

专利名称：	一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条及其在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用
摘要：	本发明提供一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条及其在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用，该检测试纸条包括PVC底板以及样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜、吸水滤纸，样品垫和吸水滤分别位于PVC底板的两侧边缘，结合垫与样品垫部分重叠且结合垫位于下方，硝酸纤维素膜的两端分别与结合垫、吸水滤纸部分重叠且硝酸纤维素膜位于下方，硝酸纤维素膜上靠近结合垫的一侧喷涂有检测线、靠近吸水滤纸的一侧喷涂有质控线，结合垫上含有胶体金标记的鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体，检测线为包被有乙酰甲胺磷人工抗原的检测线，质控线为包被有羊抗鼠IgG的质控线。该检测产品可提高乙酰甲胺磷的检测样本量和检测效率，降低相关检测工作人员的检测难度和检测成本。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	广东;44
申请人：	广州市食品检验所(广州市酒类检测中心)
发明人：	叶秋雄;张彬彬;梁俊发;张艳萍;易云婷;林嘉健;陈佩仪;毛新武;胡凌;罗奕铭;姚子升
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-21T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-21T00:00:00+0800
申请号：	CN202311055761.2
公开号：	CN117092327A
代理机构：	山西木木三专利代理事务所(普通合伙)
代理人：	颜思文
分类号：	G01N33/53;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/532;C07F9/24;G;C;G01;C07;G01N;C07F;G01N33;C07F9;G01N33/53;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/577;G01N33/58;G01N33/532;C07F9/24
申请人地址：	511400 广东省广州市番禺区市桥街道捷进二路53号
主权项：	1.一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，该检测试纸条包括PVC底板（1）以及依次排列设置在PVC底板（1）上的样品垫（2）、结合垫（3）、硝酸纤维素膜（4）、吸水滤纸（5），所述样品垫（2）和吸水滤纸（5）分别位于PVC底板（1）的两侧边缘，结合垫（3）与样品垫（2）部分重叠且结合垫（3）位于下方，硝酸纤维素膜（4）的两端分别与结合垫（3）、吸水滤纸（5）部分重叠且硝酸纤维素膜（4）位于下方，硝酸纤维素膜（4）上靠近结合垫（3）的一侧喷涂有检测线（6）、靠近吸水滤纸（5）的一侧喷涂有质控线（7），其特征在于：所述结合垫（3）上含有胶体金标记的鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体，检测线（6）为包被有乙酰甲胺磷人工抗原的检测线，质控线（7）为包被有羊抗鼠IgG的质控线。 2.根据权利要求1所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于所述乙酰甲胺磷人工抗原的制备方法如下：步骤一，以乙烯酮和O,O-二甲基硫代磷酰胺为原料，在酰化催化剂和有机溶剂的条件下发生乙酰化反应，得到乙酰化O,O-二甲基硫代磷酰胺，其中乙烯酮与O,O-二甲基硫代磷酰胺的重量比为(0.15-0.40)：1，酰化催化剂为氯化亚铁，有机溶剂为硫酸或磷酸；步骤二，将乙酰化O,O-二甲基硫代磷酰胺在异构化催化剂条件下反应，制备乙酰甲胺磷溶液，其中异构化催化剂为氧化铁、氧化锌或氧化铜；步骤三，将乙酰甲胺磷溶液依次进行结晶、固液分离、干燥，得到乙酰甲胺磷人工抗原。 3.根据权利要求2所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于所述鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体的制备方法如下：将乙酰甲胺磷人工抗原作为免疫原免疫Balb/c雌鼠，用间接ELISA法检测血清效价及特异性，筛选出血清效价最高、特异性最好的免疫小鼠，进行细胞培养，制备杂交瘤细胞，筛选杂交瘤细胞，制备鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体。 4.根据权利要求3所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于所述含有胶体金标记的鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体的结合垫（3）的制备方法如下：步骤一，胶体金溶液的制备：在圆底烧瓶中加入1L超纯水加热至沸腾，加入10 mL 1%氯金酸溶液，10 min后加入12 mL 1% 柠檬酸三钠溶液，此时溶液颜色由黑色逐渐变为酒红色，继续煮沸10 min后停止加热，冷却至室温，4℃贮存，得到浓度为0.02%、粒径为25nm的胶体金溶液；步骤二，胶体金标记的鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体的制备：将胶体金溶液用碳酸钾溶液调节pH值至8.0，搅拌混匀15min后，加入乙酰甲胺磷人工抗原，搅拌15min后，加入含有质量分数为10%牛血清白蛋白的纯净水，搅拌20 min后，离心20 min，弃上清液，加入PBS缓冲液清洗2次，将剩余沉淀用含有质量分数为2%的牛血清白蛋白的PBS缓冲液溶解混匀，按照2.0 μL /cm 的喷液量喷于结合垫（3）上，其中PBS缓冲液的pH值为7.4。 5.根据权利要求4所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于所述硝酸纤维素膜（4）的制备方法如下：取0.4 mg /mL 乙酰甲胺磷人工抗原和0.5 mg /mL 鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体，，采用三维喷点平台以0.8μL /cm 的喷量喷于硝酸纤维素膜（4）上，分别制备得到检测线（6）、质控线（7），将喷好的硝酸纤维素膜（4）置于37 ℃真空干燥箱中干燥24 h，其中0.4 mg /mL 乙酰甲胺磷人工抗原和0.5 mg /mL 鼠抗乙酰甲胺磷单克隆抗体的稀释包被液均是含有质量分数为1%海藻糖的PH值为7.4的PBS缓冲液。 6.根据权利要求5所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于所述样品垫（2）的制备方法如下：将样品垫（2）用样品处理液预先润湿，并置于37 ℃干燥箱中干燥2h。 7.根据权利要求1所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条，其特征在于：所述检测试纸条的宽度为4mm。 8.如权利要求1-7中任一项所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用。 9.根据权利要求8所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用，其特征在于：所述蔬菜样品为叶菜类、茄果类、瓜类或豆类蔬菜。 10.根据权利要求9所述的一种乙酰甲胺磷快速检测试纸条在检测蔬菜样品中乙酰甲胺磷中的应用，其特征在于所述检测过程如下：步骤一，蔬菜样品的前处理：取2±0.1g待测蔬菜样品，用3mL样品处理液对蔬菜样品浸泡2min，所述样品处理液为浓度为0.2M、pH值为9.0的硼酸缓冲液，该硼酸缓冲液中含有体积百分数为0.4%的曲拉通X-100和质量百分数为0.05%的酪蛋白钠；步骤二，检测及判断：将浸泡样品后的样品处理液用一次性滴管滴加2-3滴到样品垫（2）上，过5-10min后观察硝酸纤维素膜（4）上的显色情况，检测线（6）显色比质控线（7）深或者一样深，结果为阴性；检测线（6）显色比质控线（7）浅或检测线（6）不显色，结果为阳性；质控线（7）不显色，结果为无效。
所属类别：	发明专利