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原文传递一种蛋白分子检测方法

专利名称：	一种蛋白分子检测方法
摘要：	本发明涉及一种蛋白分子检测方法，包括以下步骤：试剂的配制以及制备磁性分子印迹纳米颗粒，并利用其实现目标蛋白的特异性富集，电极缓冲液，称取甘氨酸5.0g、三羟甲基氨基甲烷3.0g，十二烷基磺酸钠1.0g，加适量双蒸水溶解后，用1mol/l盐酸调pH至8.3，然后加双蒸水至1000ml，置于4℃保存；将需要检测的包虫蛋白分子待测样品滴加到SOI基多孔硅上，然后将滴加有包虫蛋白分子待测样品的SOI基多孔硅干燥至肉眼看不见水分为止，用紫外可见荧光分光光谱仪测干燥后的滴加有包虫蛋白分子待测样品的SOI基多孔硅的荧光，激发波长为320nm至450nm。本发明工艺简单、成本低廉、可控性强，根据光谱数据的变化可以实现待检测物的定量检测工作，检测流程更简单，操作方便快捷。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	苏州瑞柏汉生生物科技有限公司
发明人：	包鹏辉;张志强
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-10T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202311002709.0
公开号：	CN116990276A
代理机构：	北京智行阳光知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	林崇
分类号：	G01N21/64;G01N27/447;G01N27/26;G01N1/40;G;G01;G01N;G01N21;G01N27;G01N1;G01N21/64;G01N27/447;G01N27/26;G01N1/40
申请人地址：	215000 江苏省苏州市高新区长亭路8号2幢306-6室
主权项：	1.一种蛋白分子检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：试剂的配制以及制备磁性分子印迹纳米颗粒，并利用其实现目标蛋白的特异性富集，电极缓冲液，称取甘氨酸5.0g、三羟甲基氨基甲烷3.0g，十二烷基磺酸钠1.0g，加适量双蒸水溶解后，用1mol/l盐酸调pH至8.3，然后加双蒸水至1000ml，置于4℃保存；步骤二：将需要检测的包虫蛋白分子待测样品滴加到SOI基多孔硅上，然后将滴加有包虫蛋白分子待测样品的SOI基多孔硅干燥至肉眼看不见水分为止，用紫外可见荧光分光光谱仪测干燥后的滴加有包虫蛋白分子待测样品的SOI基多孔硅的荧光，激发波长为320nm至450nm；步骤三：将电活性分子或离子结合到纳米颗粒表面进行电信号转换，同时供试品溶液的制备，取新风胶囊内容物5.0g，于研钵中研成细粉，加6ml1MTris-HCl缓冲液溶解，研匀，静置5min，4000r/min离心20min，吸取上清液900μl，加300μl4×蛋白质上样缓冲液混合，沸水浴5min，以12000r/min离心20min，冷却后吸取上清液分装，每管分装20μl，-20℃贮存；步骤四：根据不同浓度包虫蛋白分子待测样品检测得到的荧光变量，建立荧光下降程度与包虫蛋白分子浓度之间的线性回归方程，进而，由线性回归方程可以得知不同荧光下降程度下包虫蛋白分子的浓度；其中：包虫蛋白分子为P38抗原；步骤五：安装电泳槽和凝胶制备，然后对其进行电泳，最终进行蛋白分子量测定，根据样品迁移距离/指示剂迁移距离计算相对迁移率，以标准蛋白质分子量对数对其相对迁移率作标准曲线，根据待测样品相对迁移率查该曲线，计算其分子量。 2.根据权利要求1所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，所述电泳结束后，打开电泳槽，取出凝胶，切去浓缩胶，保留分离胶并标记溴酚蓝前沿，置固定液中固定半小时后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶，置于水平摇床上缓慢摇动，室温染色1.5～2.5小时；倒出染色液，加入适量考马斯亮蓝脱色液，确保考马斯亮蓝脱色液可以充分覆盖凝胶，置于水平摇床上缓慢摇动，室温脱色3.5～4.5小时；更换考马斯亮蓝脱色液2～4次，直至蓝色背景全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期，完成脱色后，把凝胶保存在含20％甘油的水中，进行拍照；对拍射照片进行光密度积分值分析。 3.根据权利要求1所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，所述步骤三中通过电化学方法在磁性电极表面检测电活性物质的含量，实现目标蛋白的间接电化学检测；最后，输出并分析检测结果。 4.根据权利要求3所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，所述步骤一中将蛋白分子溶解于含有磁性纳米材料及聚合单体的溶液当中，通过硅烷化反应，将蛋白分子键合到磁性纳米颗粒表面，并洗涤去除蛋白分子后制成磁性分子印迹纳米材料。 5.根据权利要求3所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，将磁性分子印迹纳米材料分散于待测液中，进行目标蛋白的特异性富集，待富集完成后利用磁铁简单实现分离和洗涤；通过电活性分子与蛋白分子之间的生物偶联作用，将电活性分子结合到磁性分子印迹纳米材料表面，进行电信号转换，并将该材料吸附于磁性电极表面，进行电活性物质含量的电化学检测，实现蛋白分子的间接电化学检测。 6.根据权利要求1所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，通过金属配位作用，将电活性金属离子结合到磁性分子印迹纳米材料表面，进行蛋白分子的电信号转换，并将该纳米材料吸附于磁性电极表面，进行金属离子含量的电化学检测，进而实现蛋白分子的间接电化学检测。 7.根据权利要求3所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，所述SOI基多孔硅按下述方法得到：将晶向＜100＞、电阻率为3Ω·cm至3.5Ω·cm、厚度为500μm至550μm的SOI单晶硅片切成2cm×2cm的正方形，在超声仪中依次用丙酮、无水乙醇、去离子水将其彻底清洗10min，将清洗好的SOI单晶硅片放到腐蚀槽中，使SOI单晶硅片浸泡于腐蚀液浓度为HF:C2H5OH的体积比为1：3的混合液中，在腐蚀电流强度为35mA/cm2的条件下进行电化学腐蚀600s，然后用去离子水反复冲洗经过电化学腐蚀的SOI单晶硅片并在氮气中干燥，最后将其在空气中氧化72小时后得到SOI基多孔硅。 8.根据权利要求7所述的一种蛋白分子检测方法，其特征在于，所述紫外可见荧光分光光谱仪的激发波长为370nm。
所属类别：	发明专利