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原文传递一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法

专利名称：	一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法
摘要：	本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法，7种抗高血压药物及代谢物包括：氢氯噻嗪、氯噻酮、螺内酯、坎利酮、阿米洛利、氨苯蝶啶、呋塞米和吲达帕胺，方法具体包括：制备得到标准曲线方程，待测样本采用蛋白沉淀法进行处理，获得进样样本用于上机检测。本发明提供的检测方法能够同时对8种物质进行定量检测，检测时间短，分析时间短，重现性良好，加样回收率高，线性范围宽，显著提高了检测的灵敏度和准确度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南和合医学检验有限公司
发明人：	李婷;贾永娟;解娜;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2023-10-26T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202311399061.5
公开号：	CN117129611A
代理机构：	北京开阳星知识产权代理有限公司
代理人：	吕亚会
分类号：	G01N30/06;G01N30/88;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/06;G01N30/88
申请人地址：	250000 山东省济南市槐荫区美里路555号海那城总部42号楼
主权项：	1.一种液相色谱串联质谱法检测7种抗高血压药物及代谢物的方法，其特征在于，所述7种抗高血压药物及代谢物包括：氢氯噻嗪、氯噻酮、螺内酯、坎利酮、阿米洛利、氨苯蝶啶、呋塞米和吲达帕胺，所述方法至少包括以下步骤： S1、制备得到标准曲线方程，包括：配制内标工作液和标准工作液，制备得到标曲用上样溶液，使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测，获得用于计算7种抗高血压药物及代谢物含量的标准曲线方程； S2、待测样本的前处理，包括：将内标工作液、待测样本和蛋白沉淀剂混匀，离心得上清液，所述上清液中加入水I混匀，作为进样样本；所述蛋白沉淀剂为甲醇；所述待测样本为添加有甲酸的血浆，甲酸的加入量为：每1 mL血浆加入2 ~ 4 μL甲酸； S3、检测所述进样样本，包括：使用高效液相色谱质谱联用仪对所述进样样本进行检测，将所述进样样本的检测结果代入所述标准曲线方程中，得到所述待测样本中7种抗高血压药物及代谢物的含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1包括： S11、分别配制内标工作液、梯度浓度的标准工作液； S12、分别取所述内标工作液、所述标准工作液，加入水II和蛋白沉淀剂，混匀得到混合液，所述混合液中加入水III混匀，作为标曲用进样样本；所述蛋白沉淀剂为甲醇； S13、使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测，获得标准曲线方程。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S12中：所述标准品工作液和所述内标工作液的体积比为1：2；和/或，所述标准品工作液和所述水II的体积比为1：9；和/或，所述标准品工作液与所述水II的总体积和所述蛋白沉淀剂的体积比为1：4 ~ 6；和/或，所述混合液和所述水III的体积比为1：0.8 ~ 1.2。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中：所述待测样本和所述蛋白沉淀剂的体积比为1：4 ~ 6；和/或，所述待测样本和所述内标工作液的体积比为5：1；和/或，所述上清液和所述水I的体积比为1：0.8 ~ 1.2。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中：所述内标工作液、所述待测样本和所述蛋白沉淀剂进行混匀的条件为1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀3 ~ 6 min，和/或，加入水I后进行混匀的条件为：1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀0.5 ~ 1.5 min；和/或，所述离心的条件为12000 ~ 15000 r/min离心8 ~ 12 min。 6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S12中：所述混匀的条件为1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀0.5 ~ 1.5 min。 7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标工作液中含有所述7种抗高血压药物及代谢物的同位素内标：氢氯噻嗪的同位素内标为：氢氯噻嗪-[13C6]；氯噻酮的同位素内标为：氯噻酮-[13C6]；螺内酯的同位素内标为：螺内酯-d3；坎利酮的同位素内标为：坎利酮-d4；阿米洛利的同位素内标为：阿米洛利-[15N3]；氨苯蝶啶的同位素内标为：氨苯蝶啶-d5；呋塞米的同位素内标为：呋塞米-d5；吲达帕胺的同位素内标为：吲达帕胺-d3；和/或，所述内标工作液的配制方式为： S121、先分别配制含有同位素内标的内标储备液，其中除氨苯蝶啶-d5内标储备液采用DMSO和甲醇1：1的混合溶液配制外，其余内标储备液采用纯甲醇配制； S122、分别将所述内标储备液采用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液稀释为内标中间液； S123、将各内标中间液混合，采用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液配制成内标工作液。 8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S11中，所述标准工作液采用体积百分比为65% ~ 75%的甲醇水溶液稀释得到；和/或，所述梯度浓度的标准工作液的配制方式为： S121’、先分别配制含有各标准物质的标准储备液，其中除氨苯蝶啶标准储备液采用DMSO和甲醇1：1的混合溶液配制外，其余标准储备液采用纯甲醇配制； S122’、将所述阿米洛利储备液采用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液稀释为阿米洛利中间液；将所述氨苯蝶啶储备液采用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液稀释为氨苯蝶啶中间液； S123’、取所述阿米洛利中间液、所述氨苯蝶啶中间液和其余6种标准储备液采用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液配制成最高浓度标准工作液； S124’、将最高浓度标准工作液继续用体积百分比为65%~75%的甲醇水溶液依次稀释，获得梯度浓度的标准工作液。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用高效液相色谱质谱联用仪检测时的高效液相条件为：色谱柱采用C18色谱柱；流动相：A相为含有体积百分比含量为0.01% ~ 0.2%甲酸的水溶液，B相为甲醇溶液；流速：0.4 ~ 0.5 mL/min；柱温：35 ~ 45℃；进样量：1 ~ 10 µL；分析时间：5.5 min；梯度洗脱条件为： 0 ~ 1.50分钟，A：65% ~ 20%，B：35% ~ 80%； 1.5 ~ 2.50分钟，A：20% ~ 0，B：80% ~ 100%； 2.50 ~ 3.50分钟，A：0，B：100%； 3.51 ~ 5.50分钟，A：65%，B：35%。 10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，使用高效液相色谱质谱联用仪检测时的质谱条件为：采用电喷雾离子源，正负离子同时采集，采集模式采用分段采集模式：正离子模式下，以母离子/子离子表示的离子对为：氯噻酮：339.1/322.0；螺内酯：417.2/341.2；坎利酮：341.3/107.1；阿米洛利：230.2/116.1；氨苯蝶啶：254.1/237.0；吲达帕胺：365.9/132.1；负离子模式下，以母离子/子离子表示的离子对为：氢氯噻嗪：296.0/268.8；呋塞米：329.1/285.1。
所属类别：	发明专利