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原文传递一种液相色谱串联质谱法检测11种抗高血压药物和3种代谢物的方法

专利名称：	一种液相色谱串联质谱法检测11种抗高血压药物和3种代谢物的方法
摘要：	本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种液相色谱串联质谱法检测11种抗高血压药物和3种代谢物的方法。11种抗高血压药物和3种代谢物包括：卡托普利、依那普利、依那普利拉、贝那普利、贝那普利拉、福辛普利、福辛普利拉、雷米普利、喹那普利、佐芬普利、培哚普利、咪达普利、西拉普利和赖诺普利，方法包括：制备得到标准曲线方程，待测样本的前处理和上机检测。本发明可以一次检测11种抗高血药物和3种活性代谢物，前处理时间短，检测时间短，显著提高了检测效率。本发明的检测方法的精密度良好，重现性良好，加样回收率高，线性范围宽，显著提高了检测结果的灵敏度和准确度。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	济南和合医学检验有限公司
发明人：	赵娜;贾永娟;解娜;刘春冉;赵金宝;倪君君
专利状态：	有效
申请日期：	2023-10-25T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202311390395.6
公开号：	CN117129605A
代理机构：	北京开阳星知识产权代理有限公司
代理人：	吕亚会
分类号：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72;G;G01;G01N;G01N30;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
申请人地址：	250000 山东省济南市槐荫区美里路555号海那城总部42号楼
主权项：	1.一种液相色谱串联质谱法检测血液中11种抗高血压药物和3种代谢物的方法，其特征在于，所述11种抗高血压药物和3种代谢物包括：卡托普利、依那普利、依那普利拉、贝那普利、贝那普利拉、福辛普利、福辛普利拉、雷米普利、喹那普利、佐芬普利、培哚普利、咪达普利、西拉普利和赖诺普利，所述方法至少包括以下步骤： S1、制备得到标准曲线方程，包括：配制内标工作液和标准工作液，制备得到标曲用上样溶液，使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测，获得用于计算11种抗高血压药物及代谢物含量的标准曲线方程； S2、待测样本的前处理，包括：取待测血浆中加入甲酸和2 ~ 10 mol/L二硫苏糖醇溶液得到待测样本，将内标工作液和待测样本混匀，加入蛋白沉淀剂，混匀后离心得上清液，所述上清液中加入稀释液混匀，作为进样样本；所述蛋白沉淀剂为含有体积百分比浓度为0.05 ~ 0.2%甲酸、2 ~ 20 mM二硫苏糖醇的甲醇；所述稀释液为含有2 ~ 20 mM二硫苏糖醇的水溶液； S3、检测所述进样样本，包括：使用高效液相色谱质谱联用仪对所述进样样本进行检测，将所述进样样本的检测结果代入所述标准曲线方程中，得到所述待测样本中11种抗高血压药物和3种代谢物的含量。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1包括： S11、分别配制内标工作液、梯度浓度的标准工作液； S12、分别取所述内标工作液、所述标准工作液，加入水混匀，得到梯度浓度的标准溶液，加入所述蛋白沉淀剂，混匀后得混合液，取所述混合液加入所述稀释液混匀，作为标曲用进样样本； S13、使用高效液相色谱质谱联用仪对所述标曲用上样溶液进行检测，获得标准曲线方程。 3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，S12中，所述标准品工作液与所述水的体积之和所述内标工作液的体积比为5：1；所述标准品工作液和所述水的体积比为1：9；所述标准品工作液与所述水的体积之和和所述蛋白沉淀剂的体积比为1：10 ~ 12；所述混合液和所述稀释液的体积比为1：1 ~ 3：2。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中：所述待测血浆、甲酸和二硫苏糖醇溶液的体积比为1000：0.5 ~ 1.5：0.5 ~ 1.5；所述待测样本和所述内标工作液的体积比为5：1；所述待测样本和所述蛋白沉淀剂的体积比为1：10 ~ 12；所述上清液和所述稀释液的体积比为1：1 ~ 3：2。 5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述待测样本为血浆样本或者血清样本，体积为50 μL ~ 100 μL； S12中，所述标准工作液和水的体积之和等于所述待测样本的体积。 6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于， S2中：所述内标工作液和所述待测样本进行混匀的条件为1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀30s ~ 1 min；S12中：所述内标工作液、所述标准工作液和水进行混匀的条件为1500 ~2500 r/min涡旋混匀30s ~ 1 min， S2、S12中：加入蛋白沉淀剂后进行混匀的条件为：1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀5 ~ 10min；所述离心的条件为12000 ~ 15000 r/min离心5 ~ 12 min；加入所述稀释液后混匀的条件为1500 ~ 2500 r/min涡旋混匀30s ~ 1 min。 7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述内标工作液中含有所述10种抗高血压药物和3种活性代谢物的同位素内标：卡托普利的同位素内标为卡托普利-d3；依那普利的同位素内标为依那普利-d5；依那普利拉的同位素内标为依那普利拉-d5；西拉普利和贝那普利的同位素内标为贝那普利-d5；贝那普利拉的同位素内标为贝那普利拉-d5；福辛普利的同位素内标为福辛普利-d5；福辛普利拉的同位素内标为福辛普利拉-d7；雷米普利的同位素内标为雷米普利-d5；喹那普利的同位素内标为喹那普利-d5；佐芬普利的同位素内标为佐芬普利-d5；培哚普利的同位素内标为培哚普利-d4；咪达普利的同位素内标为咪达普利-d5；赖诺普利的同位素内标为赖诺普利-d5。 8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用高效液相色谱质谱联用仪检测时的高效液相条件为：色谱柱采用T3色谱柱；流动相：A相为含有体积百分比含量为0.05% ~ 0.2%甲酸、1 ~ 10 mmol/L乙酸铵的水溶液，B相为乙腈；流速：0.4 ~ 0.5 mL/min；柱温：35 ~ 45℃；进样量：5 ~ 20 µL；分析时间：6 min。 9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用高效液相色谱质谱联用仪检测时的梯度洗脱条件为： 0 ~ 0.20分钟，A：90%，B：10%； 0.20~ 0.30分钟，A：90% ~ 60%，B：10% ~ 40%； 0.30 ~ 0.80分钟，A：60%，B：40%； 0.80 ~ 0.90分钟，A：60%~40%，B：40% ~ 60%； 0.90 ~ 1.50分钟，A：40%，B：60%； 1.51 ~ 2.50分钟，A：20%，B：80%； 2.51 ~ 4.50分钟，A：2%，B：98%； 4.51 ~ 4.60分钟，A：2%~90%，B：98%~10%； 4.60 ~ 6.00分钟，A：90%，B：10%。 10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，使用高效液相色谱质谱联用仪检测时的质谱条件为：采用电喷雾离子源，正离子模式，多反应监测；雾化气体流速：3.0 L/min； DL温度：250℃；干燥气体温度：400℃；驱动气流速：10 L/min；加热气流速：10 L/min；界面温度：300℃；以母离子/子离子表示的离子对为：喹那普利的定量离子对：439.30/117.15，喹那普利的定性离子对：439.30/234.20，喹那普利内标的离子对：444.30/239.20；培哚普利的定量离子对：369.30/172.35；培哚普利的定性离子对：369.30/98.20；培哚普利内标的离子对：373.30/176.35；福辛普利的定量离子对：436.00/390.05，福辛普利的定性离子对：564.30 /436.20，福辛普利内标的离子对：441.00/395.05；卡托普利的定量离子对：218.10 / 116.10，卡托普利的定性离子对： 218.10/70.15，卡托普利内标的离子对：221.10/73.15；咪达普利的定量离子对：406.20/234.20，咪达普利的定性离子对：406.20/117.10，咪达普利内标的离子对：411.20/239.20；佐芬普利的定量离子对：430.10/105.10，佐芬普利的定性离子对：430.10/280.15，佐芬普利内标的离子对：435.10/110.10；福辛普利拉的定量离子对：436.20/109.15，福辛普利拉的定性离子对：436.20/418.20，福辛普利拉内标的离子对：443.15/153.15；西拉普利的定量离子对：418.35/211.15，西拉普利的定性离子对：418.35/70.15；依那普利的定量离子对：377.30/234.25，依那普利的定性离子对：377.30/117.20，依那普利内标的离子对：382.30/239.25；依那普利拉的定量离子对：349.10/206.40，依那普利拉的定性离子对：349.10/117.15，依那普利拉内标的离子对：354.20/211.15；贝那普利的定量离子对：425.30/351.15，贝那普利的定性离子对：425.30/190.10，贝那普利内标的离子对：430.30/356.15；贝那普利拉的定量离子对：397.30/351.15，贝那普利拉的定性离子对：397.30/118.15，贝那普利拉内标的离子对：402.30/356.15；雷米普利的定量离子对：417.30/234.20，雷米普利的定性离子对：417.30/117.15，雷米普利内标的离子对：422.30/239.20；赖诺普利的定量离子对：406.30/84.15，赖诺普利的定性离子对：406.30/246.20，赖诺普利内标的离子对：411.30/84.30。
所属类别：	发明专利