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原文传递一种利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法

专利名称：	一种利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法
摘要：	本发明涉及一种利用表面等离子体共振技术检测沙门菌，包括如下步骤：(1)芯片的制备，所述的芯片为CM5芯片；(2)细菌培养，所述的细菌为肠炎沙门菌C50041；(3)细菌与抗体孵育，所述的抗体为沙门菌PagN(3B3)蛋白抗体；(4)游离抗体分离；(5)表面等离子体共振技术检测。相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：本发明可以半定量检测样品中的沙门菌；将单克隆抗体作为检测靶标，本发明具有优良特异性；将表面等离子体共振技术应用于沙门菌检测，可以缩短检测时间；对再生条件进行了优化，可以确保检测的重复性。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	江苏;32
申请人：	扬州大学
发明人：	焦新安;胡茂志;朱洪吉;孟闯;潘志明;丁睿清;康喜龙;顾丹
专利状态：	有效
申请日期：	2023-07-20T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-03T00:00:00+0800
申请号：	CN202310895215.3
公开号：	CN116990263A
代理机构：	南京纵横知识产权代理有限公司
代理人：	董建林
分类号：	G01N21/552;G01N1/28;G;G01;G01N;G01N21;G01N1;G01N21/552;G01N1/28
申请人地址：	225009 江苏省扬州市大学南路88号
主权项：	1.一种利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：制备沙门菌检测芯片；培养待测细菌，将待测细菌与抗体孵育，游离抗体分离，通过梯度离心，将未与细菌结合的抗体分离出来；采用表面等离子体共振技术检测游离抗体的响应信号，进而计算得到待测沙门菌的含量；所述的抗体为沙门菌PagN蛋白单克隆抗体。 2.根据权利要求1所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，所述沙门菌PagN蛋白单克隆抗体包含重链可变区和轻链可变区；所述重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，所述轻链可变区包含VL CDR1、VLCDR2和VL CDR3；所述的VH CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示；所述的VH CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示；所述的VH CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO：3所示；所述的VL CDR1的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示；所述的VL CDR2的氨基酸序列为SEQ ID NO：5所示；所述的VL CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO：6所示。 3.根据权利要求2所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示；轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：8所示。 4.根据权利要求2所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，重链氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示；轻链氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示。 5.根据权利要求2所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，编码所述单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示；编码所述单克隆抗体的重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO：18所示。 6.根据权利要求2所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，编码所述单克隆抗体重链的核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示；编码所述单克隆抗体轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO：20所示。 7.根据权利要求1所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，所述沙门菌检测芯片的制备方法包括：将Anti mouse IgG通过氨基偶联的方式固定到CM5芯片表面，随后用乙醇胺溶液对未结合的位点进行封闭；选择pH5.0醋酸钠溶液作为偶联缓冲液。 8.根据权利要求1所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，所述培养待测细菌包括：将待测细菌落接种于LB液体培养基中培养过夜，随后菌液以1:100的比例接种于LB液体培养基，37℃，220r/min，培养3h；然后，用PBS在15mL离心管中洗涤3次，1500×g离心10min。 9.根据权利要求1所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，所述将待测细菌与抗体孵育包括：取沙门菌PagN蛋白单克隆抗体与待测细菌菌液混合，室温孵育。 10.根据权利要求1所述的利用表面等离子体共振技术检测沙门菌的方法，其特征在于，所述梯度离心包括：将与抗体孵育后的菌液按照200、400、800、1200、1600×g分别离心2min。
所属类别：	发明专利