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原文传递检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒

专利名称：	检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒
摘要：	本发明属于食品检测技术领域，具体涉及检测含乳产品中的过敏原的方法及试剂盒，所述方法包括如下步骤：样品制备步骤：使用提取液提取所述含乳产品中的蛋白组分，得到含有蛋白组分的成分(A)，所述提取液为碱性缓冲性溶液，任选的，所述缓冲性溶液中含有非离子型表面活性剂；酶联免疫检测步骤：利用双抗体夹心法对所述成分(A)进行酶联免疫检测；并且，所述含乳产品包括适度水解蛋白产品，所述过敏原为β‑乳球蛋白。本发明通过大量的实验，获得了能够对过敏原有很好提取效果并且不破坏其结构的前处理方法，对于提高检测结果的准确性提供了极大帮助。且所述方法检测限值较低，检测结果准确。
专利类型：	发明专利
申请人：	黑龙江飞鹤乳业有限公司;飞鹤(哈尔滨)乳品有限公司;飞鹤(镇赉)乳品有限公司;飞鹤(甘南)乳品有限公司;飞鹤(龙江)乳品有限公司
发明人：	王象欣;解庆刚;崔东影;张影;陆思宇;高鹏;蒋士龙;张永久;蔡方良;冷友斌
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-23T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-21T00:00:00+0800
申请号：	CN202311070840.0
公开号：	CN117092350A
代理机构：	北京格罗巴尔知识产权代理事务所(普通合伙)
代理人：	项军花
分类号：	G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/577;G01N21/31;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/68;G01N33/531;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/577;G01N21/31
申请人地址：	164800 黑龙江省齐齐哈尔市克东县克东镇庆祥街1号;;;;
主权项：	1.一种检测含乳产品中的过敏原的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：样品制备步骤：使用提取液提取所述含乳产品中的蛋白组分，得到含有蛋白组分的成分(A)，所述提取液为碱性缓冲性溶液，任选的，所述缓冲性溶液中含有非离子型表面活性剂；酶联免疫检测步骤：利用双抗体夹心法对所述成分(A)进行酶联免疫检测；并且，所述含乳产品包括适度水解蛋白产品，所述过敏原为β-乳球蛋白。 2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述提取液为含有吐温系表面活性剂的CBS溶液。 3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，在所述样品制备步骤中，包括将提取液与所述含乳产品混合后加热的操作步骤。 4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，在所述酶联免疫检测步骤中，包括如下操作步骤：获得抗原抗体复合物的步骤，其中，将所述成分(A)加入到包被有捕获抗体的酶标板上以得到所述抗原抗体复合物，所述捕获抗体为牛β-乳球蛋白的兔抗免疫血清；检测抗体检测的步骤，其中，使用检测抗体与所述原抗体复合物进行反应；所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛β-乳球蛋白的兔多克隆抗体；显色和光学检测的步骤，其中，所述光学检测采用吸光光度的检测。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，在所述酶联免疫检测步骤中，包括如下操作步骤： (1)包被：使用CBS溶液稀释捕获抗体，加入至酶标板中，包被酶标板；所述捕获抗体为牛β-乳球蛋白的兔抗免疫血清； (2)封闭：弃去酶标板中的液体，使用PBST溶液洗涤酶标板，加入封闭液，封闭酶标板； (3)抗原抗体反应：弃去封闭液，使用PBST溶液洗涤酶标板，加入所述成分(A)，进行抗原抗体反应，获得抗原抗体复合物； (4)抗原抗体复合物与检测抗体反应：弃去酶标板中的液体，使用PBST溶液洗涤酶标板，加入利用抗体稀释工作液稀释的检测抗体，所述抗原抗体复合物与检测抗体进行反应；所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛β-乳球蛋白的兔多克隆抗体； (5)显色：弃去酶标板中的液体，使用PBST溶液洗涤酶标板，加入显色液，孵育； (6)终止：加入终止液，终止显色反应； (7)测定：用酶标仪测定各孔在450nm下的吸光度值。 6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述(3)抗原抗体反应与所述(4)抗原抗体复合物与检测抗体反应的反应温度为37℃，反应时间为1h或20min。 7.一种检测含乳产品中的过敏原的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括酶标板、抗原标准品、抗原标准品保护液、检测抗体、抗体稀释工作液、洗涤液、提取液、显色液和终止液；其中，所述酶标板被捕获抗体包被并被封闭液封闭，所述捕获抗体为牛β-乳球蛋白的兔抗免疫血清，所述检测抗体为辣根过氧化物酶标记的牛β-乳球蛋白的兔多克隆抗体，所述含乳产品包括适度水解蛋白产品，所述过敏原为β-乳球蛋白。 8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述提取液为碱性缓冲性溶液。 9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于，所述提取液为含有吐温系表面活性剂的CBS溶液。 10.根据权利要求7～9中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述封闭液为含有OVA和PC300的Tris-HCl溶液，所述抗体稀释工作液为含有OVA、蔗糖和PC300的PBST溶液；所述抗原标准品保护液为含有BSA和PC300的PBST溶液。
所属类别：	发明专利