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原文传递一种利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法及其应用

专利名称：	一种利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法及其应用
摘要：	本发明涉及一种利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法及其应用，所述方法包括选择中性粒细胞荧光标记斑马鱼、受试物第一次处理、受试物第二次处理、计算斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量，若斑马鱼经受试物第一次处理无显著的炎症反应，但第二次处理后会迅速发生免疫应答，出现炎症反应，则说明该受试物会诱导斑马鱼Ⅳ型超敏反应。应用活体斑马鱼进行Ⅳ型超敏反应评价具有简单、快速、经济、高效、高通量、可视化等优点。本发明对功效性化妆品领域、功能性食品领域产品的安全性评价有重要意义。
专利类型：	发明专利
申请人：	云南贝泰妮生物科技集团股份有限公司;云南云科特色植物提取实验室有限公司
发明人：	安晓虹;马文静;张超;王飞飞;马骁;郭振宇
专利状态：	有效
申请日期：	2023-08-29T00:00:00+0800
发布日期：	2023-11-28T00:00:00+0800
申请号：	CN202311093841.7
公开号：	CN117129661A
代理机构：	北京品源专利代理有限公司
代理人：	刘逸卿
分类号：	G01N33/50;G01N21/64;G;G01;G01N;G01N33;G01N21;G01N33/50;G01N21/64
申请人地址：	650106 云南省昆明市高新区科医路53号;
主权项：	1.一种利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，所述方法包括： (1)斑马鱼选取：选取中性粒细胞荧光标记斑马鱼； (2)受试物第一次处理：将斑马鱼分为第一对照组和第一实验组，第一对照组用标准稀释水处理，第一实验组用受试物处理，将斑马鱼置于体式荧光显微镜下观察； (3)受试物第二次处理：若第一对照组、第一实验组斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量存在显著差异，则调整受试物的浓度，重复步骤(2)至第一对照组、第一实验组斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量不存在显著差异；若第一对照组、第一实验组斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量不存在显著差异，将第一实验组分为第二对照组和第二实验组，第二对照组和第一对照组使用标准稀释水处理，第二实验组使用受试物处理，将斑马鱼置于体式荧光显微镜下观察； (4)数据分析：若第一对照组、第二对照组和第一实验组斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量不存在显著差异，且第一实验组和第二实验组斑马鱼背部及卵黄囊中性粒细胞数量存在显著差异，则说明该受试物会诱导斑马鱼发生Ⅳ型超敏反应。 2.根据权利要求1所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，步骤(1)所述斑马鱼为受精后2-5天的中性粒细胞荧光标记斑马鱼。 3.根据权利要求1或2所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，所述荧光标记包括红色荧光标记或绿色荧光标记。 4.根据权利要求1-3中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，受试物第一次处理的时间为5-180min。 5.根据权利要求1-4中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，受试物第二次处理的时间为5-180min。 6.根据权利要求1-5中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，受试物第一次处理和受试物第二次处理的间隔时间为8-24h。 7.根据权利要求1-6中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，所述受试物第一次处理在25-30℃下进行。 8.根据权利要求1-7中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法，其特征在于，所述受试物第二次处理在25-30℃下进行。 9.根据权利要求1-8中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法在检测化妆品原料或成品致敏性中的应用。 10.根据权利要求1-8中任一项所述的利用中性粒细胞转基因斑马鱼检测Ⅳ型超敏反应的方法在检测功能性食品原料或成品致敏性中的应用。
所属类别：	发明专利