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一种检测土壤纤维素酶活性的分析方法
| 专利名称： | 一种检测土壤纤维素酶活性的分析方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种检测土壤中纤维素酶活性的分析方法：1)称取筛分的 土壤风干样品n份于n支粗试管中，向各试管中加入醋酸缓冲溶液，使用 旋涡振荡器振荡，在振荡条件下取土壤悬液至96微孔板(占有n个微孔)， 向n-1个孔中加入4-MUB-7-β-D-纤维二糖苷底物溶液，另一孔中加入等量 水作为无底物对照，向第n+1个孔中加入等量底物溶液和等量水作为无土 壤对照，恒温条件下振荡培养；2)培养结束后向微孔板中加入NaOH终止 反应；3)多功能酶标仪对反应产物进行荧光测定；4)计算纤维素酶活性。 本发明的优点为：1)与传统方法相比，减短了培养时间，省略了过滤等操 作程序，简化了操作步骤；2)微孔板内的荧光物质可通过多功能酶标仪在 15s内同时获得测定数据，允许大量样品同时进行测定；3)准确度高，易 操作；4)结果稳定可靠，重现性好。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 辽宁;21 |
| 申请人： | 中国科学院沈阳应用生态研究所 |
| 发明人： | 张丽莉;武志杰;陈利军 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2008-05-23T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200810011539.1 |
| 公开号： | CN101586146 |
| 代理机构： | 沈阳科苑专利商标代理有限公司 |
| 代理人： | 马 驰;周秀梅 |
| 分类号： | C12Q1/34(2006.01)I |
| 申请人地址： | 110016辽宁省沈阳市沈河区文化路72号 |
| 主权项： | 1.一种检测土壤中纤维素酶活性的分析方法，其特征在于： 1)以已知系列浓度的MUB溶液为标准物，采用酶标仪进行荧光检测， 发射光波长365nm，测定光波长470nm；作为测定的标准曲线；以MUB标 准溶液的系列浓度和测定的吸光值A`制作工作标准曲线，得到斜率b； 2)分别称取n份3-5g过1-2mm筛的土壤风干样品于n支粗试管中， n为≥3的正整数，向各试管中加入30-50ml 0.45-0.55mol·L-1pH5.0-6.0的醋 酸缓冲溶液，使用微量进液枪在旋涡振荡条件下取100μl土壤悬液加入微孔 板中，占有n个微孔，向n-1个孔中加入10mM 4-MUB-β-D-纤维二糖苷 100μl，另一孔中加入100μl水作为无底物对照，向第n+1个孔中加入100μl 底物溶液和100μl水作为无土壤对照；25℃-30℃条件下振荡培养2.5-3.5h； 分别向孔内加入100μl 2-2.5mol·L-1NaOH终止反应； 3)将微孔板置入多功能酶标仪进行荧光检测，发射光波长365nm，测 定光波长470nm；在多功能酶标仪上测定荧光度为A； 4)根据吸光值A和斜率b，计算所测滤液中MUB的浓度S，S＝A*b； 4)在多功能酶标仪上测定荧光度为A 5)根据MUB的量计算出酶活性；计算公式为：x＝[S*(30-50)]/(V*b*T) 式中：x为纤维素酶活性(单位：μmol MUB·g-1·h-1)，S为步骤4所获得的 荧光物质的浓度，V为反应体系内的溶液总体积(单位ml)，b为称取的土 壤重量(单位：g)，T为培养时间(单位：h)。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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