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一种区分DNA与相应RNA的核酸扩增检测方法和检测试剂盒
| 专利名称： | 一种区分DNA与相应RNA的核酸扩增检测方法和检测试剂盒 |
| 摘要： | 本发明属医学检测技术领域，具体为一种区分DNA与相应转录的RNA的核酸扩增检测方法，并提供相应的检测试剂盒。该试剂盒包括裂解液、核酸提取液、溶菌酶溶液、逆转录缓冲液、逆转录酶系、结核DNA PCR反应液、结核RNA PCR反应液等。其中选用的引物分别针对结核杆菌染色体DNA的一段ITS序列或IS6110序列、核糖体RNA上的一段16Sr RNA的序列，探针最好为Tagman MGB探针，并选用不同的荧光素标记。本发明的试剂盒，含有UNG酶组分，可以判定每个细菌内含有16S r RNA的相对量，用来判断标本中的结核杆菌的生长情况以监测感染状态。本发明简便快捷，可专一性RNA及专一性DNA检测，为临床提供更全面的信息。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 上海科华生物工程股份有限公司 |
| 发明人： | 周科隆;袁青;王缦 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2009-12-25T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN200910200983.2 |
| 公开号： | CN101948908A |
| 代理机构： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 |
| 代理人： | 陆飞;盛志范 |
| 分类号： | C12Q1/68(2006.01)I |
| 申请人地址： | 200233 上海市钦州北路1189号 |
| 主权项： | 一种区分DNA与相应转录的RNA的核酸扩增检测方法，其特征在于设计一条与检测RNA末端部分互补的辅助寡核苷酸，该寡核酸序列由位于5’端的S区与位于3’端的T区组成，其T区序列与检测靶RNA的末端互补，S区的序列与人工引物一致，S与T中间可隔几个碱基；人工引物是用作扩增的引物之一，其序列可由设计者自由引入；整个检测体系中含有RT引物、人工引物、辅助寡核酸、TaqMan探针4种寡核酸；其中由RT引物与人工引物组成一对有效的扩增引物对； 辅助寡核酸只用作逆转录后的延伸，PCR扩增前为UNG消化降解，不进入扩增检测环节，为防止辅助寡核酸自行延伸，将其3’端封闭或修饰其自由羟基；TaqMan MGB探针用作扩增产物的检测；具体步骤如下：a)逆转录与RNA 5’末端转换模板合成：RT引物(16R)以16S rRNA为模板，在逆转录酶作用下延伸，当延伸至5’末端时，与反应体系中的辅助寡核苷酸杂交而通过SMART机制继续合成至辅助寡核苷酸的5’末端；b)取上述步骤产生的新模板加入到荧光PCR体系中，体系中的UNG酶将辅助寡核苷酸消化；c)由“逆转录引物16R”与“人工引物”组成的引物对新模板进行有效的PCR扩增。用设计于16S rRNA上的特异性TaqMan探针对扩增产物进行实时检测。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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