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原文传递一种植物酪氨酸酶的染色方法

专利名称：	一种植物酪氨酸酶的染色方法
摘要：	本发明涉及一种植物酪氨酸酶的染色方法，该方法是先提取植物的酪氨酸酶后进行聚丙烯酰胺凝胶非变性电泳，电泳后的凝胶板放入含有L-多巴、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙、过氧化氢酶和二甲基甲酰胺的染色液中染色，直到凝胶板棕色反应带清晰出现后用清水冲洗终止显色反应，棕色带即为酪氨酸酶反应带。该种方法程序简单，对仪器设备要求不高，染色专一性强，而且可以确定酪氨酸酶的大致分子量，结果准确可靠。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	山东;37
申请人：	山东理工大学
发明人：	王长泉
专利状态：	有效
申请日期：	2010-09-02T00:00:00+0800
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201010269518.7
公开号：	CN101968411A
分类号：	G01N1/30(2006.01)I
申请人地址：	255086 山东省淄博市高新技术开发区高创园D座1012室
主权项：	植物酪氨酸酶的染色方法，其特征是包括如下步骤：(1)酪氨酸酶提取，取盐地碱蓬幼苗幼叶按照料液比1∶5～10(w/v)加入60mmol?L?1磷酸缓冲液(pH?5.7)于冰浴研磨，研磨液以8000～10000g于4℃离心15～30分钟，上清液即为酪氨酸酶提取液，于?70℃保存备用。(2)取(1)中所得酪氨酸酶提取液进行聚丙烯酰胺凝胶非变性电泳，每个泳道加样20～30μL酪氨酸酶提取液，样品中不加巯基乙醇并且不用沸水煮以保持蛋白质活性。(3)取(2)中电泳后的凝胶板进行酪氨酸酶的活性染色，将凝胶板放入60mmol?L?1磷酸缓冲液(pH6.8))中平衡10～20分钟。然后转移到100ml染色反应液中染色30～60分钟，染色液成分是磷酸缓冲液(pH6.8)包含5mmol?L?1L?多巴，4mmol?L?13?甲基?2?苯并噻唑啉酮腙，50μg?mL?1过氧化氢酶，2％N，N′?二甲基甲酰胺。凝胶板棕色反应带清晰出现后用清水冲洗终止显色反应，棕色带即为酪氨酸酶反应带。
所属类别：	发明专利