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原文传递一种基于AuPB@Au NPs荧光检测酪氨酸酶的方法

专利名称：	一种基于AuPB@Au NPs荧光检测酪氨酸酶的方法
摘要：	本发明提供一种基于AuPB@Au NPs荧光检测酪氨酸酶的方法，该检测方法利用硝酸铁溶液与氨三乙酸三钠发生螯合反应制备Fe(NTA)标签修饰的AuPB@Au‑Fe(NTA)NPs，修饰于核壳纳米表面的Fe(NTA)的羟基基团能与多巴胺的酚羟基形成络合物Fe(NTA)DA，荧光增强；当体系中出现TYR时，催化氧化多巴胺变成成多巴醌时，不能形成络合物Fe(NTA)DA，荧光减弱。据此构建了AuPB@Au NPs荧光传感器，与不同浓度的酪氨酸酶建立标准曲线。通过本发明，使用荧光法检测酪氨酸酶，提高了检测体系的准确性，实现了原位定量检测。
专利类型：	发明专利
申请人：	福建师范大学
发明人：	陆德婵;翁婷炜;卢玉栋;黄祖芳;朱兰瑾
专利状态：	有效
申请日期：	1900-01-20T17:00:00+0805
发布日期：	1900-01-20T00:00:00+0805
申请号：	CN202010187852.1
公开号：	CN111208109A
代理机构：	福州科扬专利事务所
代理人：	李晓芬
分类号：	G01N21/64;C09K11/58;B82Y20/00;B82Y30/00;B82Y40/00;G;C;B;G01;C09;B82;G01N;C09K;B82Y;G01N21;C09K11;B82Y20;B82Y30;B82Y40;G01N21/64;C09K11/58;B82Y20/00;B82Y30/00;B82Y40/00
申请人地址：	350300 福建省福州市福清市龙江街道校园新村一号福建师范大学研发中心
主权项：	1.一种基于AuPB@Au NPs荧光检测酪氨酸酶的方法，其特征在于，包括以下步骤： S1、制备AuPB@Au NPs基底； S2、制备不同浓度的酪氨酸酶标准溶液，加入多巴胺进行共培养，接着加入AuPB@Au NPs基底混匀后，得AuPB@Au NPs荧光检测基底； S3、将步骤S2制备的AuPB@Au NPs荧光检测基底进行荧光光谱检测；记录在318 nm处的荧光强度，酪氨酸酶活性为横坐标作出相对应的荧光工作曲线； S4、将待测物质进行荧光光谱检测后，并通过荧光工作曲线计算出待测物质中酪氨酸酶的浓度。 2.根据权利要求1所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述工作曲线为y=−10.93x+5183，其中Y为318 nm处的荧光强度；x为酪氨酸酶的浓度，R2=0.981。 3.根据权利要求2所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于，步骤S2的具体步骤为：将多巴胺溶液与等体积的酪氨酸酶标准溶液混合的标准混合溶液，接着将AuPB@Au-Fe(NTA)溶液和等体积的标准混合溶液混合，在室温下，轻微振荡3-15min，使溶液分散均匀，得AuPB@Au NPs荧光检测基底。 4.根据权利要求3所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于，所述AuPB@Au NPs基底的制备方法如下： AuPB@Au NPs的合成取10mL纳米金胶溶液，加入10-20μL浓度为0.1mol/L的普鲁士蓝溶液作为拉曼信号分子，搅拌混合均匀后离心，重新悬浮于10mL超纯水中，得Au@PB胶体；往10mL的制备好的Au@PB胶体中加入250μL浓度为6*10-2 mol/L的柠檬酸钠溶液，磁力搅拌加热至沸腾后，加入2.5mL浓度为1mmol/L氯金酸溶液后停止加热，继续磁力搅拌1h后，将胶体离心洗涤2次，重新分散于5mL超纯水中，得到AuPB@Au胶体；（2）Fe（NTA）溶液的合成首先取浓度为10−3 M的九水硝酸铁溶液和浓度为10−3 M的氨三乙酸三钠溶液按体积1:1混合后，往溶液中添加pH调节剂调节Fe（NTA）溶液的pH 为7.0，混合液静置，得Fe（NTA）溶液；（3）AuPB@Au NPs荧光检测基底的制备将步骤（1）制备好的AuPB@Au胶体与步骤（2）制备的Fe（NTA）溶液按体积1:1混合后，搅拌混合后，离心洗涤除去未反应的Fe（NTA），去除上清液，剩下AuPB@Au-Fe(NTA)胶体备用。 5.根据权利要求4所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于，所述纳米金胶溶液的制备方法如下：取100mL质量分数为0.01%的氯金酸溶液在磁力搅拌下加热至沸腾；然后取1-1.5 mL质量分数为1%柠檬酸钠溶液，加入到沸腾的上述氯金酸溶液中，待沸腾15min后，反应结束，冷却至室温，制成纳米金溶胶。 6.根据权利要求5所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述步骤（2）的pH调节剂为浓度为0.1 mol/L的氢氧化钠溶液。 7.根据权利要求6所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤（3）的搅拌时间为至少30 min。 8.根据权利要求7所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：步骤S2中所述多巴胺溶液和酪氨酸酶标准溶液使用体积均为500μL。 9.根据权利要求8所述一种检测酪氨酸酶的方法，其特征在于：所述多巴胺溶液的浓度为10-3M。
所属类别：	发明专利