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一种牛巴贝斯虫LAMP检测方法
| 专利名称： | 一种牛巴贝斯虫LAMP检测方法 |
| 摘要： | 本发明提供一种牛巴贝斯虫的LAMP检测方法，通过被检标本DNA提取、设置LAMP检测试剂盒、LAMP扩增、扩增产物分析，通过被检标本出现的颜色变化与阳性对照和阴性对照比对判定。本发明提供的方法，可非常方便快速、准确地检测出被检标本中的牛巴贝斯虫，也可用于牛巴贝斯虫的分子流行病学调查及疗效监测。本方法的模板制备步骤简单费用低，并能提高检测方法的特异性及敏感性。通过加入适量SYBRGREENI染料即可通过肉眼观测结果，仪器要求简单，耗时短，结果判定简单，特异性和灵敏度高，可满足临床检测的需要，前景广阔。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 浙江;33 |
| 申请人： | 浙江大学 |
| 发明人： | 杜爱芳;王素华;李群;周前进 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2010-09-17T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201010285586.2 |
| 公开号： | CN101974621A |
| 代理机构： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 |
| 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 分类号： | C12Q1/68(2006.01)I |
| 申请人地址： | 310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 |
| 主权项： | 一种牛巴贝斯虫LAMP检测方法，其特征在于，通过以下技术方案实现：(1)被检标本DNA提取：取200μl无菌抗凝血液，Trizol试剂裂解后常规的酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，干燥后用三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸溶解，4℃保存备用；(2)设置LAMP检测试剂盒：由Dof管、阳性对照、阴性对照、BstDNA聚合酶、SYBRGREENI染料、dNTP、甜菜碱、10×LAMPBuffer组成；(3)LAMP扩增：在Dof管中加入处理后的标本DNA，同时设阴、阳性对照，每管反应体系为：1mmol/LFIP，1mmol/LBIP，0.2mmol/LF3，0.2mmol/LB3，4mmol/LMgSO4，0.8mmol/LdNTP，0.8mmol/Lbetaine，10×LAMPBuffer，1μLDNA模板，加入8UBstDNA聚合酶大片段，混匀后稍离心，置水浴锅中进行扩增，扩增条件为：62℃水浴反应60分钟，接着80℃终止5分钟；(4)扩增产物分析：将扩增产物中加入1∶10稀释的SYBRGREENI(10000×)1μL，肉眼观察颜色变化，被检标本出现的颜色变化与阳性对照和阴性对照比对，以判定标本为牛巴贝斯焦虫阳性或阴性。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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