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一种羊巴贝斯虫的通用检测试剂盒
| 专利名称： | 一种羊巴贝斯虫的通用检测试剂盒 |
| 摘要： | 本发明公开一种羊巴贝斯虫抗体检测的通用试剂盒。本发明的羊巴贝斯虫的通用检测试剂盒内至少包括有截短的羊巴贝斯虫AMA1重组抗原的底物包被品。本发明是以羊巴贝斯虫微线体分泌的AMAl蛋白为检测标识，将目的基因在大肠杆菌中表达纯化该蛋白，用已获得的重组抗原建立间接ELISA试剂盒，用以检测或诊断羊巴贝斯虫病，本发明弥补现有技术的不足，首次建立一种能检测羊巴贝斯虫未定种及莫氏巴贝斯虫6个虫株感染的通用诊断试剂盒，用于羊巴贝斯虫抗体的定性检测，具有操作简便、节约成本、高通量和易于标准化等优点。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 甘肃;62 |
| 申请人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 发明人： | 关贵全;徐建林;王锦明;刘军龙;刘爱红;李有全;罗建勋;殷宏 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2019-03-20T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-08-02T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201910211134.0 |
| 公开号： | CN110082534A |
| 代理机构： | 兰州振华专利代理有限责任公司 |
| 代理人： | 张晋 |
| 分类号： | G01N33/68(2006.01);G;G01;G01N;G01N33 |
| 申请人地址： | 730046 甘肃省兰州市城关区盐场堡徐家坪1号 |
| 主权项： | 1.一种羊巴贝斯虫的通用检测试剂盒，其特征在于试剂盒中至少包括有羊巴贝斯虫AMA1截短重组蛋白。 2.根据权利要求1所述的羊巴贝斯虫的通用检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有预包被酶标版、血清稀释液、阳性对照血清、阴性对照血清、酶标结合物、洗涤液、底物显色液和终止液。 3.截短的羊巴贝斯虫AMA1重组抗原的制备方法，其特征在于以羊巴贝斯虫cDNA为模板，用引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2扩增目的片段，将得到的目的片段和pET-30a用EcoR I和Not I双酶切，双酶切的目的片段和线性pET-30a产物进行纯化回收，连接，并将其转化到表达菌株BL21(DE3)，表达产物经Ni-NTA亲和层析处理，得到截短的羊巴贝斯虫AMA1重组抗原。 4.根据权利要求3所述的截短的羊巴贝斯虫AMA1重组抗原的制备方法，其特征在于以羊巴贝斯虫未定种新疆株cDNA为模板。 5.权利要求1或2所述检测试剂盒用于羊巴贝斯虫非疾病诊断的检测方法，将稀释后的羊巴贝斯虫AMA1重组抗原包被于酶标板，用PBST洗涤酶标板后用封闭液37℃封闭，再用PBST洗涤酶标板后加入待检血清，再用PBST洗涤后，加入经PBST稀释的辣根过氧化物酶标记的鼠源抗羊单克隆抗体，再加入TMB进行显色，再加入终止液终止反应，根据显色情况确定被检样品是否感染羊巴贝斯虫。 6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于：最佳包被浓度为0.5ug/孔；血清最佳稀释倍数为1：20；酶标结合物最佳稀释倍数为1：2000；5%BSA为最佳封闭液。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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