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链球菌2型GDH基因荧光定量PCR检测方法
| 专利名称： | 链球菌2型GDH基因荧光定量PCR检测方法 |
| 摘要： | 一种生物技术领域的猪链球菌2型GDH基因的荧光定量PCR检测方法，根据猪链球菌的GDH基因的序列，设计一对特异性引物F1、R1和TaqMan探针，探针5′端标记的荧光报告基团为FAM，3′端标记的淬灭基团为Eclipse，扩增目的片断长度为81bp；将含有目的基因的片段克隆到pMD18-T载体中，转化到JM109感受态细胞，挑取阳性克隆鉴定；提取阳性质粒，用分光光度计测定OD260nm值，并将质粒浓度换算成拷贝数/μl，质粒标准品10倍梯度稀释作为模板，在荧光定量PCR仪上检测，得出标准曲线；采集猪血液并提取血液全基因组DNA，采用已建立的荧光定量PCR方法，根据标准曲线计算出待检样品中猪链球菌含量；本发明可以实时定量检测血液中细菌含量，灵敏度高、特异性强、重复性好，易于推广应用。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 上海;31 |
| 申请人： | 上海交通大学 |
| 发明人： | 杨志彪;崔立;袁聪俐;华修国;杨卫军 |
| 专利状态： | 有效 |
| 申请日期： | 2010-10-19T00:00:00+0800 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201010511965.9 |
| 公开号： | CN101948928A |
| 代理机构： | 上海交达专利事务所 31201 |
| 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 分类号： | C12Q1/68(2006.01)I |
| 申请人地址： | 200240 上海市闵行区东川路800号 |
| 主权项： | 一种链球菌2型GDH基因荧光定量PCR检测方法，其特征在于，根据猪链球菌的GDH基因的序列，设计一对特异性引物F1、R1和TaqMan探针，探针5′端标记的荧光报告基团为FAM，3′端标记的淬灭基团为Eclipse，扩增目的片断长度为81bp；将含有目的基因的片段克隆到pMD18 T载体中，转化到JM109感受态细胞，挑取阳性克隆鉴定；提取阳性质粒，用分光光度计测定OD260nm值，并将质粒浓度换算成拷贝数/μL，质粒标准品10倍梯度稀释作为模板，在荧光定量PCR仪上检测，得出标准曲线；采集猪血液并提取血液全基因组DNA，采用已建立的荧光定量PCR方法，根据标准曲线计算出待检样品中猪链球菌含量；所述的引物，是指序列为：F1：5′ CCAAAGCTTCATGACTGAATTGC 3′，R1：5′ CGACCACCGACACCGATG 3′；所述的探针，是指：5′ (FAM)ACACATCGGACCTTCACTTGACGCC(Eclipse) 3′。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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