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一种氯噻啉生物发光侧流免疫层析方法
| 专利名称： | 一种氯噻啉生物发光侧流免疫层析方法 |
| 摘要： | 本发明涉及一种氯噻啉生物发光侧流免疫层析方法，首先将分析物与重组示踪物共同竞争硝酸纤维素膜上的捕获抗体的结合位点，然后洗膜，并加入反应底物产生荧光信号，配合手机检测配件，使用智能手机对检测结果进行拍照，最后对手机拍照的图像进行分析及结果判定。本发明提供的方法利用噬菌体展示多肽模拟表位与可催化发光酶的重组蛋白为示踪物，配合智能手机，以侧流层析的方式实现对小分子化合物的检测。本发明灵敏度高、快速、简便、经济、实用性强，可以实现现场定量检测。 |
| 专利类型： | 发明专利 |
| 国家地区组织代码： | 江苏;32 |
| 申请人： | 南京农业大学 |
| 发明人： | 王鸣华;华修德;丁园 |
| 专利状态： | 有效 |
| 发布日期： | 2019-01-01T00:00:00+0800 |
| 申请号： | CN201810016879.7 |
| 公开号： | CN108562741A |
| 分类号： | G01N33/558(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N33;G01N33/558 |
| 申请人地址： | 210095 江苏省南京市卫岗1号 |
| 主权项： | 1.一种氯噻啉生物发光侧流免疫层析方法，其特征包括：第一步：重组示踪物与分析物共同竞争捕获抗体的结合位点，硝酸纤维素(NC)膜的处理：用PBS稀释的分析物抗体(3.6mg/mL)和抗His‑tag抗体(1.5mg/mL)分别作为检测(test，T)线和控制(control，C)线，喷在NC膜上，两条线的间距为5mm，将NC膜在37℃下干燥1小时，然后与样品垫(玻璃纤维垫)和吸水垫组装成整条，将组装好的膜切成5mm宽，并装入暗盒中，在室温下储存备用；加样：将50μL的样品与50μL的重组示踪物：SEQ ID No.1所示序列(含有5μg蛋白质，0.2％吐温20和2mg/mL BSA)混合，并将混合物加入到上样孔并流过膜15分钟；第二步：检测NC膜上的抗体捕获的重组示踪物，洗膜：加入100μL PBS洗膜10分钟；加入底物：从光学窗口向NC膜中加入发光底物产生发光信号；生物发光信号检测：将暗盒插入到手机检测配件中，并安装在智能手机上，开启相机，适当时间后手机拍照记录图像；第三步：检测结果的分析及结果判定，方法1：将图片导入imageJ 1.46r软件中，测量T线和相邻T线区域的平均光密度(背景信号)，而后扣除背景信号得到校正后的T线平均光密度值，以校正后的光密度值为纵坐标，氯噻啉标准溶液的对数为横坐标建立标准曲线，获得线性方程，将检测结果带入线性方程中计算出样品中氯噻啉的含量；方法2：用肉眼观察手机拍摄的图像，相对阴性对照的结果，若T线区域蓝色荧光强度未减弱为阴性，若T线区域蓝色荧光强度明显减弱为弱阳性，若无蓝色荧光条带则为阳性。 |
| 所属类别： | 发明专利 |
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