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原文传递一种检测畜禽肉中氯噻啉含量的方法

专利名称：	一种检测畜禽肉中氯噻啉含量的方法
摘要：	本发明涉及一种检测畜禽肉中氯噻啉含量的方法，属于食品检测技术领域。本发明优化了待测样品前处理方法以及液相色谱、质谱条件，解决了现有方法不能测定畜禽肉氯噻啉药物残留的缺陷。本发明方法在10‑400ng/mL范围内线性关系良好，检出限为5.0μg/kg，不同畜禽肉基质中方法回收率为91.41％‑93.51％，相对标准偏差在2.4％‑3.2％之间。本发明具有操作简便，分析速度快，灵敏度高，重现性好的特点。对食品检测领域的畜禽肉中氯噻啉药物残留的定量检测有重要意义。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	北京;11
申请人：	北京市营养源研究所
发明人：	周大卫;崔亚娟;鲁绯;李东
专利状态：	有效
申请日期：	2019-02-27T00:00:00+0800
发布日期：	2019-05-10T00:00:00+0800
申请号：	CN201910147403.1
公开号：	CN109738551A
分类号：	G01N30/02(2006.01);G;G01;G01N;G01N30
申请人地址：	100069 北京市丰台区东滨河路4号
主权项：	1.一种检测畜禽肉中氯噻啉含量的方法，采用高效液相色谱质谱联用法进行检测，其特征在于，包括对待测样品前处理的步骤；其中，对待测样品前处理所用提取试剂为乙腈、甲酸、氯化钠和无水硫酸钠；乙腈与甲酸的体积比为10:0.1；以ml/g计，乙腈与氯化钠、无水硫酸钠的体积重量比分别为10:1和10:4；对待测样品提取液采用PSA吸附剂和C18吸附剂进行吸附净化，其中，PSA吸附剂和C18吸附剂的重量比为1:3。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，以ml/g计，所述提取试剂中乙腈与待测样品的体积重量比为10:(1-4)，优选为10:2。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品前处理方法如下：将待测样品用匀浆后，准确称取2.00g样品(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入10mL乙腈，0.1mL甲酸，1.00g氯化钠，4.00g无水硫酸钠；漩涡振荡提取1min，在10℃下、于5000r/min离心5min；转移上层有机相至装有50mg PSA吸附剂和150mg C18吸附剂的25mL离心管中；漩涡振荡1min，在10℃下、于5000r/min离心5min；转移上清液，氮吹至干；用1.00mL 50％的乙腈水溶液复溶，经0.22μm微孔滤膜过滤后，作为供试样品液，供液相色谱串联质谱测定。 4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，液相色谱条件如下：流动相：A相，乙腈；B相，0.1％甲酸水溶液；采用如下条件进行梯度洗脱：时间/分钟流动相A/％流动相B/％ 0-1.0 5 95 1.0-4.0 5-95 95-5 4.0-5.0 95 5 5.0-5.1 95-5 5-95 5.1-8.0 5 95。 5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，液相色谱采用C18色谱柱，和/或柱温35℃，和/或流速0.30mL/min，和/或进样量10μL。 6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其特征在于，质谱参数如下： 7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，质谱采用电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI+)，检测方式为多反应检测模式(MRM)，离子源温度为550℃，电喷雾电压为5500V，雾化气压力0.050MPa，辅助加热气压力0.050MPa，气帘气压力0.015MPa。 8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于，采用校正曲线法进行定量分析。 9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤： 1)样品前处理将待测样品用均质机匀浆后，准确称取2.00g样品(精确到0.01g)于50mL离心管中，加入10mL乙腈，0.1mL甲酸，1.00g氯化钠，4.00g无水硫酸钠。拧紧离心管盖后漩涡振荡提取1min，在10℃下，于5000r/min离心5min。转移上层有机相，转移至装有50mg PSA吸附剂和150mg C18吸附剂的25mL离心管中。拧紧离心管盖后漩涡振荡1min，在10℃下，于5000r/min离心5min。转移上清液，氮吹至干。用1.00mL 50％的乙腈水溶液复溶，经0.22μm微孔滤膜过滤后，作为供试样品液供液相色谱串联质谱测定； 2)液相色谱条件 C18色谱柱，流动相为乙腈(A)和0.1％甲酸/水溶液(B)，梯度洗脱程序如下：时间/分钟流动相A/％流动相B/％ 0-1.0 5 95 1.0-4.0 5-95 95-5 4.0-5.0 95 5 5.0-5.1 95-5 5-95 5.1-8.0 5 95 柱温35℃，流速0.30mL/min，进样量10μL； 3)质谱条件质谱采用电喷雾离子源正离子扫描模式(ESI+)，检测方式为多反应检测模式(MRM)，离子源温度为550℃，电喷雾电压为5500V，雾化气压力0.050MPa，辅助加热气压力0.050MPa，气帘气压力0.015MPa。 4)制备校正曲线取阴性猪肉基质5份，每份2.00g，再将50ng/mL的氯噻啉标准工作液分别以20μL，40μL，100μL，200μL，400μL的体积，加入到阴性猪肉基质组分中，按照前处理的方法将其处理，最终将这5份溶液依次注入液相色谱-质谱联用仪中，测得相应的峰面积分别为5102，18035，49427，112256，221843，依据氯噻啉的添加量计算得到对应浓度为1.0ng/mL，2.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，20ng/mL的标准系列，将峰面积与浓度对应，利用最小二乘法计算，得到氯噻啉基质添加校正曲线； 5)结果计算将待测样品经前处理后所得供试样品液注入液相色谱-质谱联用仪中，测得相应的峰面积，由标准曲线得到供试样品液中氯噻啉的浓度，进一步按下式(1)计算得到待测样品中氯噻啉含量； X＝C×V/m…………………………(1) 式(1)中： X———待测样品中氯噻啉的含量，单位为微克每千克或微克每升(μg/kg)； C———由标准曲线计算所得的供试样品液中氯噻啉的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)； V———供试样品液最终定容体积，单位毫升(mL)； m———待测样品重量，单位克(g)。 10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其特征在于，所述畜禽包括猪、牛、羊、马、骆驼、家兔、狗、鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑。
所属类别：	发明专利