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1.一种畜肉中左旋咪唑含量的检测方法, 其特征在于,所述的畜肉中左旋咪唑含量的检测方法,包括以下步骤:(一)待测物质的提取:称取待测均匀样品2.0g于50mL聚丙烯塑料离心管中,加入40μL内标(100ng/mL),再加入10mL乙腈,于30℃水浴下超声提取30 min。提取结束后, 4500 转/min的转速离心5 min;(二)提取液的净化:取步骤(一)离心后所得上层提取液5 mL过活化后的HLB固相萃取柱净化(分别用3.0mL乙腈、3mL超纯水活化),收集流出液与5mL玻璃试管中;(三)提取液的浓缩:将步骤(二)所收集的洗脱液于45℃水浴下氮吹至近干,加入10%乙腈含0.2%甲酸溶液溶解定容至1.0mL,涡旋混匀后过0.22μm滤膜,UPLC‑MS‑MS分析测试;(四)仪器条件:色谱柱: BEH C18柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm,Waters公司);柱温:40℃;流速为0.3 mL/min;流动相为(A)0.3%甲酸;(B)乙腈;进样方式:梯度洗脱,梯度洗脱程序如表1所示。进样体积:2.0μm; 质谱参数:电喷雾电离负离子模式(ESI‑);毛细管电压:3000 V;干燥气温度:160℃;干燥气流速:16L/min;雾化气压力:30 psi;鞘气温度:350 ℃;鞘气流速:12 L/min;扫描模式:多反应监测(MRM);(五)所述的左旋咪唑结构为,分子量为204.29,CAS号为:14769‑73‑4; (六)标准曲线的制备:分别准确称取适量左旋咪唑标准品和内标于10 mL容量瓶中,用乙腈溶解后定容至刻度,充分混匀得到标准储备液,于‑18℃冰箱中放置保存。以标准储备液配制出100ng/mL 的中间液和内标中间液,再分别取适量中间液及内标中间液以10%乙腈含0.2%甲酸稀释成1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 ng/mL的标准曲线系列,内标浓度均为2.0ng/mL,按照步骤(四)进样分析;(七)定量方法UPLC‑MS‑MS进样分析后,以标准曲线溶液中左旋咪唑的峰面积与其内标的比值为Y值,浓度为X(ng/mL)值,进行标准曲线拟合,得出各物质标准曲线Y=AX+B;样品的测定结果按式(1)计算:w = ‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑‑(1)式中:w ──样品中左旋咪唑的含量,单位为微克每千克(μg/kg); ──标准曲线计算出的样品的浓度(ng/mL);V ──样品的定容体积,单位为毫升(mL);──稀释倍数;m ──样品称样量,单位为克(g)。 |