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原文传递一种基于双敏化结构的甲胎蛋白光电化学竞争免疫型传感器的制备及应用

专利名称：	一种基于双敏化结构的甲胎蛋白光电化学竞争免疫型传感器的制备及应用
摘要：	本发明公开一种基于双敏化结构的甲胎蛋白光电化学竞争免疫型传感器的制备及应用。该传感界面的构筑方法是以二氧化钛介晶作为探针基底并固定甲胎蛋白抗体(Ab)，以硫化铋作为电极基底固定甲胎蛋白抗原，通过抗原与抗体之间的特异性结合构建出一种双敏化结构的传感器。将修饰有甲胎蛋白抗原的电极放入含有不同浓度游离抗原和一定量标记探针的混合溶液中，使游离的目标抗原与固定化抗原竞争结合标记探针。在光照条件下，结合了探针的电极就能产生一定强度的光电流，通过该双敏化结构实现对电流信号的放大。且随着游离目标物浓度的增加，固定化抗原结合探针的数量减少光电流强度也随之减小。基于该现象可建立起对于甲胎蛋白的光电分析方法。
专利类型：	发明专利
国家地区组织代码：	福建;35
申请人：	福建师范大学
发明人：	戴宏;陈妍洁;郑祥钦;高利红;衣欢;林丹玫
专利状态：	有效
发布日期：	2019-01-01T00:00:00+0800
申请号：	CN201810716181.6
公开号：	CN108872341A
代理机构：	福州智理专利代理有限公司 35208
代理人：	王义星
分类号：	G01N27/327(2006.01)I;G01N27/30(2006.01)I;G;G01;G01N;G01N27;G01N27/327;G01N27/30
申请人地址：	350108 福建省福州市闽侯县上街镇学园路福建师大旗山校区福建师大科研处
主权项：	1.一种基于双敏化结构的甲胎蛋白光电化学竞争免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）玻碳电极（GCE）的预处理：GCE首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光，用二次水洗去表面残留粉末，再移入超声水浴中清洗，直至清洗干净，最后依序用乙醇，稀酸和水彻底洗涤；（2）Bi2S3/IL /AFP修饰电极的制备：将3μL浓度为3mg/mL 的Bi2S3纳米片悬浮液滴涂于干净的玻碳电极表面，红外灯下烘干，冷却至室温；然后在上述电极表面修饰3μL浓度为1mg/mL的离子液体(IL)，在红外灯下烘干冷却至室温，即得到Bi2S3/IL修饰电极；随后，将修饰好的电极浸泡在含有1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)的混合溶液中活化50min；最后，在修饰电极上滴加7μL 浓度为0.01ng/mL甲胎蛋白（AFP）溶液并孵育50min，使之与EDC/NHS通过酰胺键结合到电极表面；然后用pH7.0的磷酸缓冲溶液去除多余的AFP，再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h，封闭电极表面上非特异性活性位点，冲去表面残余液后，即得到Bi2S3/IL/AFP修饰电极；（3）Bi2S3/IL/AFP/Ab‑TiO2‑PEI修饰电极的制备：首先，在50μL浓度为3mg/mL 的TiO2介晶中滴加5μL 浓度为10 mg/mL的聚乙烯亚胺(PEI)搅拌1~2 min，并冷冻数小时；将混合液离心10 min得到沉淀物用50μL超纯水洗涤并稀释；然后，在溶液中加入 10μL 5 wt.%戊二醛在4℃下孵育1h；在此基础上，将AFP单克隆抗体与上述溶液按体积比为1：4比例混合并在冰箱中孵育2h；最后，将该混合物离心10 min，取出上清液，用50μL超纯水溶解沉淀物，即得到Ab‑TiO2‑PEI标记探针；将AFP抗原配制成不同浓度的标准溶液并与一定数量的Ab‑TiO2‑PEI标记探针混合；最后将Bi2S3/IL/AFP修饰电极浸入上述该混合溶液，于4°C下孵育50min，利用竞争反应使Ab‑TiO2‑PEI标记探针结合在固定电极表面；用pH7.0的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面残余液并在室温条件下自然晾干，即得到Bi2S3/IL/AFP/Ab‑TiO2‑PEI修饰电极；(4)甲胎蛋白的检测：采用三电极体系进行测定，以Bi2S3/IL/AFP/Ab‑TiO2‑PEI修饰电极为工作电极，Ag/AgCl为参比电极，铂丝电极为辅助电极，利用光电化学工作站进行检测，设置电压为0.1V，每隔10s进行开关灯，氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤；在pH 7.0的 PBS缓冲溶液中，通过光电化学工作站进行检测1×10‑6 ng/mL–10 ng/mL之间的一系列不同浓度的甲胎蛋白标准溶液，通过记录开关灯前后产生的不同电流信号，绘制工作曲线；待测样品溶液代替甲胎蛋白标准溶液进行检测，检测的结果通过工作曲线查得。
所属类别：	发明专利